Hibridación in situ con fluorescencia (FISH): definición
La hibridación fluorescente in situ (FISH) es una prueba de laboratorio utilizada en patología para detectar y localizar la presencia o ausencia de secuencias de ADN específicas en los cromosomas. Funciona mediante el uso de sondas fluorescentes que se unen únicamente a aquellas partes del cromosoma que coinciden o son complementarias con la sonda. Se utiliza comúnmente en el diagnóstico de cáncer y ciertos síndromes genéticos.
¿Cómo funciona la hibridación in situ por fluorescencia?
- Preparación de la sonda: se diseña una sonda fluorescente para que coincida con la secuencia de ADN específica de interés. Luego, esta sonda se marca con un tinte fluorescente. Se pueden marcar diferentes sondas con diferentes tintes para detectar múltiples objetivos simultáneamente.
- Preparación de la muestra: el ADN de la muestra (como células de una muestra de sangre, una biopsia o secciones de tejido) se desnaturaliza, lo que significa que se calienta para separar el ADN bicatenario en hebras simples.
- Hibridación: la sonda marcada con fluorescencia se aplica a la muestra, donde busca y se une (hibrida) a su secuencia de ADN complementaria dentro del genoma.
- Lavado: después de la hibridación, la muestra se lava para eliminar cualquier exceso de sonda que no se haya unido a su ADN objetivo. Este paso ayuda a reducir la señal de fondo y mejorar la especificidad de la detección.
- Detección: La muestra se examina bajo un microscopio de fluorescencia. Las sondas que se han unido a secuencias de ADN específicas emitirán fluorescencia y su ubicación podrá visualizarse y analizarse.
¿Por qué se realiza esta prueba?
La capacidad de la hibridación fluorescente in situ para proporcionar información genética precisa a nivel celular la convierte en una herramienta invaluable en el diagnóstico y tratamiento de cánceres y enfermedades genéticas.
- Detección de anomalías cromosómicas: FISH puede identificar mutaciones, deleciones, duplicaciones y translocaciones genéticas específicas asociadas con diversas enfermedades y afecciones genéticas, incluidos los cánceres. Por ejemplo, se usa ampliamente para detectar el cromosoma Filadelfia en la leucemia mieloide crónica (LMC), una translocación específica entre los cromosomas 9 y 22.
- Diagnóstico y pronóstico del cáncer: al identificar cambios genéticos específicos de ciertos tipos de cáncer, FISH ayuda a diagnosticar la enfermedad, determinar su pronóstico y seleccionar las terapias adecuadas. Por ejemplo, se utiliza para detectar HER2/neu amplificación en el cáncer de mama, que puede influir en las decisiones de tratamiento.
- Enfermedades genéticas: FISH se utiliza en el diagnóstico de afecciones genéticas, como el síndrome de Down, al detectar la presencia de una copia adicional del cromosoma 21.
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