Patoloogiasõnastiku meeskond
Aprill 5, 2023
In situ hübridisatsioon (ISH) on laboritest, mida kasutatakse geneetilise materjali, näiteks DNA või RNA nägemiseks rakkudes või kudedes. Seda kasutatakse tavaliselt meditsiinis spetsiifiliste geenide või geeniproduktide tuvastamiseks ja visualiseerimiseks ning nakkusetekitajate, näiteks viirused.
ISH hõlmab väikese märgistatud geneetilise materjali tüki (nukleiinhappesondi) kasutamist, mis on sihtmärk-geneetilise materjaliga komplementaarne (vastupidine). Sondi saab kombineerida erinevat tüüpi märgistega, nagu fluorestseeruvad värvained, radioaktiivsed isotoobid või ensüümid, mis võimaldavad sondi rakkude sees näha.
ISH teostamiseks fikseeritakse ja töödeldakse kõigepealt koeproov, et säilitada selle struktuur ja valmistada see ette hübridiseerimiseks. Seejärel inkubeeritakse kude märgistatud sondiga, mis kinnitub (hübridiseerub) sihtmärk-geneetilise materjaliga, kui see on olemas. Järelejäänud sond pestakse ära ja ülejäänud sondi-sihtmärgi kombinatsioonid tuvastatakse, kasutades ühte mitmest meetodist.
ISH-tehnikaid on mitut erinevat tüüpi, sealhulgas fluorestseeruv in situ hübridisatsioon (FISH), kromogeenne in situ hübridisatsioon (CISH) ja RNA in situ hübridisatsioon (ISH-RNA). FISH ja CISH kasutavad sihtmärgiks oleva geneetilise materjali asukoha visualiseerimiseks vastavalt fluorestseeruvaid või kromogeenseid märgiseid, samas kui ISH-RNA tuvastab spetsiifiliselt RNA molekulid rakkudes või kudedes.