Immunohistokemia (IHC)

Immunohistokemia (IHC) on laajalti käytetty laboratoriotesti, joka sisältää vasta-aineiden käytön spesifisten antigeenien (proteiinien) havaitsemiseksi soluissa kudosleikkeissä. Patologit käyttävät tätä testiä tiettyjen proteiinien jakautumisen ja lokalisoinnin näkemiseen kudoksen eri osissa, mikä tarjoaa arvokasta diagnostista, ennuste- ja ennustavaa tietoa.

Kuinka immunohistokemia toimii?

Immunohistokemian taustalla oleva periaate perustuu vasta-aineen ja sen antigeenin väliseen spesifiseen sitoutumisaffiniteettiin. Vasta-aine on suunniteltu kohdistamaan ja sitoutumaan spesifiseen kiinnostavaan proteiiniin kudosnäytteessä. Kun tämä vuorovaikutus on sitoutunut, se visualisoidaan käyttämällä tunnistusjärjestelmää, mikä johtaa värilliseen tai fluoresoivaan signaaliin, joka voidaan nähdä mikroskoopilla.

Immunohistokemian vaiheet

1. Näytteen valmistelu: Kudosnäytteitä kerätään, usein läpi biopsia tai kirurginen resektioja kiinnitetään sitten kudosarkkitehtuurin säilyttämiseksi. Formaliini on yleisesti käytetty kiinnitysaine. Kudos upotetaan parafiinivahaan leikkaamisen helpottamiseksi.
2. Leikkaus: Parafiiniin upotettu kudoslohko leikataan ohuiksi osiksi (yleensä 4-5 mikrometriä paksuiksi) mikrotomin avulla. Nämä osat asetetaan mikroskoopin objektilaseille värjäystä varten.
3. Parafiinien poisto ja uudelleenhydratointi: Objektilasit käsitellään parafiinin poistamiseksi ja kudosten rehydratoimiseksi, tyypillisesti käyttämällä ksyleeniä (tai vaihtoehtoja) ja sen jälkeen luokiteltuja alkoholeja.
4. Antigeenin haku: Monet antigeenit peittyvät kiinnitysprosessin aikana. Antigeenin hakuun kuuluu leikkeiden käsittely lämmöllä tai entsyymeillä näiden antigeenisten kohtien paljastamiseksi, jolloin ne tulevat vasta-aineiden saataville.
5. Estäminen: Epäspesifiset sitoutumiskohdat estetään käyttämällä proteiiniliuosta primäärisen vasta-aineen epäspesifisen sitoutumisen estämiseksi, mikä voi johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin.
6. Primaarisen vasta-aineen inkubaatio: Objektilasia inkuboidaan ensisijaisen vasta-aineen kanssa, joka on spesifinen kiinnostuksen kohteena olevalle antigeenille. Tämä vaihe mahdollistaa vasta-aineen sitoutumisen kohdeantigeeniinsä kudoksessa.
7. Havaitseminen: Sitoutumattoman primaarisen vasta-aineen pesemisen jälkeen lisätään sekundäärinen vasta-aine. Tämä vasta-aine on konjugoitu entsyymiin (kuten piparjuuriperoksidaasiin tai alkaliseen fosfataasiin) tai fluoresoivaan leimaan, ja se on suunniteltu sitoutumaan ensisijaiseen vasta-aineeseen. Sekundaarisen vasta-aineen läsnäolo visualisoidaan sitten kolorimetrisellä reaktiolla (entsyymikonjugoitujen vasta-aineiden tapauksessa) tai fluoresenssilla (fluoresoivasti leimattujen vasta-aineiden tapauksessa). Kolorimetristä havaitsemista varten lisätään substraatti, jonka entsyymi muuntaa näkyväksi, värilliseksi tuotteeksi antigeeni-vasta-ainevuorovaikutuskohdassa.
8. Vastavärjäys: Kudosarkkitehtuurin visualisoinnin parantamiseksi levylle levitetään tyypillisesti lievää vastaväriä (esim. hematoksyliiniä), joka värjää solua. ytimet kontrastivärisellä värillä.
9. Asennus ja visualisointi: Objektilasi peitetään peitinlasilla ja värjättyä kudosta tutkitaan valo- tai fluoresoivalla mikroskoopilla. Värjäytymisen sijainti, intensiteetti ja kuvio antavat käsityksen antigeenin läsnäolosta ja jakautumisesta kudoksessa.

Sovellukset

Immunohistokemia on tärkeä diagnostisessa patologiassa syöpäsolujen tyypin ja alkuperän tunnistamisessa, tartuntatautien diagnosoinnissa ja samannäköisten tilojen erottamisessa.

Immunohistokemiasta on tullut välttämätön väline patologiassa, koska se kykenee spesifisesti tunnistamaan proteiineja kudosten monimutkaisessa arkkitehtuurissa, ja se vaikuttaa merkittävästi diagnostiikkaan, ennusteisiin ja kohdennettujen hoitojen kehittämiseen.

Ilmentymismallit immunohistokemiassa

Immunohistokemiassa värjäytymismallit - ytimessä, sytoplasmisessa ja kalvossa - viittaavat antigeenin (proteiinin) lokalisoitumiseen solun eri osastoissa. Jokainen kuvio tarjoaa arvokkaita näkemyksiä proteiinin toiminnasta ja proteiinia ekspressoivasta solutyypistä.

Ydinilmaisu

Tuman ilmentyminen tapahtuu, kun IHC-värjäys paikantuu soluun tuma, jossa DNA- ja RNA-synteesi tapahtuu ja monet säätelyproteiinit sijaitsevat. Esimerkkejä proteiineista, jotka osoittavat tuman ilmentymistä, ovat transkriptiotekijät, tumareseptorit ja proteiinit, jotka osallistuvat DNA:n replikaatioon ja korjaamiseen. Esimerkiksi estrogeenireseptori (ER) rintasyöpäsoluissa osoittaa tuman värjäytymistä, koska se toimii transkriptiotekijänä, joka säätelee geenien ilmentymistä.

Tumavärjäyksellä on merkitystä diagnosoitaessa sairauksia, joihin liittyy muutoksia geeniekspressiossa tai solusyklin säätelyssä. Se on erityisen tärkeä syövissä, joissa tumaproteiinien, kuten hormonireseptorien, läsnäolo tai puuttuminen voi ohjata hoitopäätöksiä.

Sytoplasminen ilmentyminen

Sytoplasmista ilmentymistä havaitaan, kun värjäys on jakautunut koko alueelle sytoplasma, solua ympäröivä osa tuma ja sisältää erilaisia ​​organelleja ja sytoskeleton.
Esimerkkejä proteiineista, jotka osoittavat sytoplasmista ilmentymistä, ovat entsyymit, rakenneproteiinit ja tietyt signalointimolekyylit. Esimerkki sisältää sytokeratiinit, jotka ovat välimuotoisia filamenttiproteiineja, joita löytyy epiteelisolujen sytoplasmasta.

Sytoplasminen värjäys auttaa tunnistamaan solut, jotka tuottavat spesifisiä proteiineja, jotka osallistuvat aineenvaihduntaan, signalointiin tai solurakenteeseen. Nämä tiedot voivat olla ratkaisevan tärkeitä kasvainten diagnosoinnissa ja luokittelussa, aineenvaihduntasairauksien ymmärtämisessä ja tartunta-aineiden tunnistamisessa.

Membraaninen ilme

Membraaninen ilmentyminen viittaa värjäytymiseen, joka sijoittuu solukalvoon, rajaan, joka erottaa solun sen ulkoisesta ympäristöstä ja välittää kommunikaatiota muiden solujen ja solunulkoisen matriisin kanssa. Esimerkkejä proteiineista, jotka osoittavat kalvoekspressiota, ovat kalvoreseptorit, kuljettajat ja soluadheesiomolekyylit. Tunnettu esimerkki on HER2/neu yliekspressio tietyissä rintasyövissä, joissa HER2-proteiini havaitaan kalvon värjäytymiskuviona.

Membraaninen värjäys on erityisen tärkeä solunulkoisiin signaaleihin reagoivien tai solu-solu- tai solu-matriisivuorovaikutuksiin osallistuvien solujen tunnistamiseksi. Onkologiassa spesifisten kalvoproteiinien läsnäolo voi viitata kasvaimen aggressiivisuuteen ja sen herkkyyteen kohdennetuille hoidoille.

Näiden ilmentymismallien ymmärtäminen on perustavanlaatuista immunohistokemian soveltamisessa diagnostisessa patologiassa. Sen avulla patologit voivat tehdä tarkkoja diagnooseja, ymmärtää sairauksien patofysiologiaa ja antaa tietoa hoitostrategioista. Esimerkiksi läsnäolon määrittäminen ER (ydinekspressio) ja HER2 (kalvon ilmentyminen) rintasyöpäsoluissa on ratkaiseva päätettäessä hormonihoidosta ja vastaavasti kohdennetusta hoidosta.

Yleiset immunohistokemialliset markkerit

CD34

Sytokeratiini 7 (CK7)

Sytokeratiini 20 (CK20)

Desmin

Estrogeenireseptori (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Progesteronireseptori (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

Tietoja tästä artikkelista

Lääkärit kirjoittivat tämän artikkelin auttaakseen sinua lukemaan ja ymmärtämään patologiaraporttisi. Ota yhteyttä jos sinulla on kysyttävää tästä artikkelista tai patologiaraportistasi. Lue täydellinen johdatus patologiaraporttiisi Tämä artikkeli.

Muita hyödyllisiä resursseja

Patologian atlas