In situ -hybridisaatio (ISH)

Mitä on in situ -hybridisaatio?

In situ -hybridisaatio (ISH) on laboratoriotesti, jota käytetään geneettisen materiaalin, kuten DNA:n tai RNA:n, näkemiseen soluissa tai kudoksissa. Sitä käytetään yleisesti lääketieteessä tunnistamaan ja visualisoimaan tiettyjä geenejä tai geenituotteita sekä havaitsemaan tartunnanaiheuttajia, kuten virukset.

Miten in situ -hybridisaatio toimii?

ISH sisältää pienen leimatun geneettisen materiaalin (nukleiinihappokoettimen) käytön, joka on komplementaarinen (vastakohta) kohdegeenimateriaalille. Koettimeen voidaan yhdistää erilaisia ​​leimoja, kuten fluoresoivia väriaineita, radioaktiivisia isotooppeja tai entsyymejä, jotka mahdollistavat koettimen näkemisen solujen sisällä.

ISH:n suorittamiseksi kudosnäyte ensin kiinnitetään ja käsitellään sen rakenteen säilyttämiseksi ja sen valmistelemiseksi hybridisaatiota varten. Kudosta inkuboidaan sitten leimatun koettimen kanssa, joka kiinnittyy (hybridisoituu) kohteen geneettiseen materiaaliin, jos sitä on läsnä. Jäljelle jäänyt koetin pestään sitten pois, ja jäljellä olevat koetin-kohdeyhdistelmät havaitaan käyttämällä yhtä useista menetelmistä.

Mitkä ovat erilaiset in situ -hybridisaatiotyypit?

On olemassa useita erilaisia ​​ISH-tekniikoita, mukaan lukien fluoresoiva in situ -hybridisaatio (FISH)kromogeeninen in situ -hybridisaatio (CISH) ja RNA in situ -hybridisaatio (ISH-RNA). FISH ja CISH käyttävät vastaavasti fluoresoivia tai kromogeenisiä leimoja visualisoidakseen kohteen geneettisen materiaalin sijainnin, kun taas ISH-RNA havaitsee spesifisesti RNA-molekyylejä soluissa tai kudoksissa.