इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (IHC)



इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला प्रयोगशाला परीक्षण है जिसमें ऊतक वर्गों के भीतर कोशिकाओं में विशिष्ट एंटीजन (प्रोटीन) का पता लगाने के लिए एंटीबॉडी का उपयोग शामिल है। पैथोलॉजिस्ट इस परीक्षण का उपयोग ऊतक के विभिन्न हिस्सों के भीतर विशिष्ट प्रोटीन के वितरण और स्थानीयकरण को देखने के लिए करते हैं, जिससे मूल्यवान निदान, पूर्वानुमान और भविष्य कहनेवाला जानकारी मिलती है।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री कैसे काम करती है?

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के पीछे का सिद्धांत एक एंटीबॉडी और उसके एंटीजन के बीच विशिष्ट बंधन संबंध पर आधारित है। एंटीबॉडी को ऊतक के नमूने के भीतर रुचि के एक विशिष्ट प्रोटीन को लक्षित करने और बांधने के लिए डिज़ाइन किया गया है। एक बार बाध्य होने पर, इस इंटरैक्शन को एक डिटेक्शन सिस्टम का उपयोग करके देखा जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एक रंगीन या फ्लोरोसेंट सिग्नल प्राप्त होता है जिसे माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जा सकता है।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में शामिल कदम

  1. नमूना तैयार करना: ऊतक के नमूने अक्सर एकत्र किए जाते हैं बीओप्सी या सर्जिकल लकीर, और फिर ऊतक वास्तुकला को संरक्षित करने के लिए तय किया गया। फॉर्मेलिन आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला फिक्सेटिव है। सेक्शनिंग की सुविधा के लिए ऊतक को पैराफिन मोम में एम्बेडेड किया जाता है।
  2. अनुभागीकरण: पैराफिन-एम्बेडेड ऊतक ब्लॉक को माइक्रोटोम का उपयोग करके पतले वर्गों (आमतौर पर 4-5 माइक्रोमीटर मोटे) में काटा जाता है। इन अनुभागों को धुंधला करने के लिए माइक्रोस्कोप स्लाइड पर रखा जाता है।
  3. डिपैराफिनाइजेशन और पुनर्जलीकरण: पैराफिन को हटाने और ऊतकों को पुनर्जलीकरण करने के लिए स्लाइडों का उपचार किया जाता है, आमतौर पर जाइलीन (या विकल्प) का उपयोग किया जाता है और उसके बाद वर्गीकृत अल्कोहल का उपयोग किया जाता है।
  4. एंटीजन पुनर्प्राप्ति: निर्धारण प्रक्रिया के दौरान कई एंटीजन छिप जाते हैं। एंटीजन पुनर्प्राप्ति में इन एंटीजेनिक साइटों को उजागर करने के लिए गर्मी या एंजाइमों के साथ अनुभागों का इलाज करना शामिल है, जिससे वे एंटीबॉडी के लिए सुलभ हो जाते हैं।
  5. अवरुद्ध करना: प्राथमिक एंटीबॉडी को गैर-विशिष्ट रूप से बांधने से रोकने के लिए गैर-विशिष्ट बाइंडिंग साइटों को प्रोटीन समाधान का उपयोग करके अवरुद्ध किया जाता है, जिससे गलत-सकारात्मक परिणाम हो सकते हैं।
  6. प्राथमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन: स्लाइड को प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया जाता है जो रुचि के एंटीजन के लिए विशिष्ट है। यह चरण एंटीबॉडी को ऊतक में अपने लक्ष्य एंटीजन से जुड़ने की अनुमति देता है।
  7. जांच: किसी भी अनबाउंड प्राथमिक एंटीबॉडी को धोने के बाद, एक द्वितीयक एंटीबॉडी जोड़ा जाता है। यह एंटीबॉडी एक एंजाइम (जैसे हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज या क्षारीय फॉस्फेट) या एक फ्लोरोसेंट लेबल से संयुग्मित होता है और प्राथमिक एंटीबॉडी से जुड़ने के लिए डिज़ाइन किया गया है। फिर द्वितीयक एंटीबॉडी की उपस्थिति को वर्णमिति प्रतिक्रिया (एंजाइम-संयुग्मित एंटीबॉडी के मामले में) या प्रतिदीप्ति (फ्लोरोसेंटली लेबल वाले एंटीबॉडी के मामले में) के माध्यम से देखा जाता है। वर्णमिति पहचान के लिए, एक सब्सट्रेट जोड़ा जाता है जिसे एंजाइम एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरैक्शन के स्थल पर एक दृश्यमान, रंगीन उत्पाद में परिवर्तित कर देता है।
  8. काउंटरस्टेनिंग: ऊतक वास्तुकला के दृश्य को बढ़ाने के लिए, एक हल्का काउंटरस्टेन (उदाहरण के लिए, हेमेटोक्सिलिन) आमतौर पर स्लाइड, स्टेनिंग सेल पर लगाया जाता है नाभिक एक विपरीत रंग के साथ.
  9. माउंटिंग और विज़ुअलाइज़ेशन: स्लाइड को कवरस्लिप से ढक दिया जाता है, और दाग वाले ऊतक की जांच एक प्रकाश या फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। धुंधला होने का स्थानीयकरण, तीव्रता और पैटर्न ऊतक के भीतर एंटीजन की उपस्थिति और वितरण में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है।

अनुप्रयोगों

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री कैंसर कोशिकाओं के प्रकार और उत्पत्ति की पहचान करने, संक्रामक रोगों का निदान करने और समान दिखने वाली स्थितियों के बीच अंतर करने के लिए नैदानिक ​​विकृति विज्ञान में सहायक है।

ऊतकों की जटिल वास्तुकला के भीतर विशेष रूप से प्रोटीन की पहचान करने की अपनी क्षमता के माध्यम से, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री पैथोलॉजी में एक अनिवार्य उपकरण बन गई है, जो निदान, पूर्वानुमान और लक्षित उपचारों के विकास को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित कर रही है।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में अभिव्यक्ति के पैटर्न

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री में, धुंधला होने के पैटर्न - परमाणु, साइटोप्लाज्मिक और झिल्लीदार - कोशिका के विभिन्न डिब्बों के भीतर एंटीजन (प्रोटीन) के स्थानीयकरण को संदर्भित करते हैं। प्रत्येक पैटर्न प्रोटीन के कार्य और प्रोटीन को व्यक्त करने वाली कोशिका के प्रकार में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करता है।

परमाणु अभिव्यक्ति

परमाणु अभिव्यक्ति तब होती है जब IHC धुंधलापन कोशिका में स्थानीयकृत होता है नाभिक, जहां डीएनए और आरएनए संश्लेषण होता है, और कई नियामक प्रोटीन स्थित होते हैं। परमाणु अभिव्यक्ति दिखाने वाले प्रोटीन के उदाहरणों में प्रतिलेखन कारक, परमाणु रिसेप्टर्स और डीएनए प्रतिकृति और मरम्मत में शामिल प्रोटीन शामिल हैं। उदाहरण के लिए, स्तन कैंसर कोशिकाओं में एस्ट्रोजन रिसेप्टर (ईआर) परमाणु धुंधलापन दिखाता है क्योंकि यह एक प्रतिलेखन कारक के रूप में कार्य करता है जो जीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री परमाणु अभिव्यक्ति

परमाणु धुंधलापन उन बीमारियों के निदान में महत्वपूर्ण है जिनमें जीन अभिव्यक्ति या कोशिका चक्र विनियमन में परिवर्तन शामिल है। यह कैंसर में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जहां हार्मोन रिसेप्टर्स जैसे परमाणु प्रोटीन की उपस्थिति या अनुपस्थिति उपचार निर्णयों का मार्गदर्शन कर सकती है।

साइटोप्लाज्मिक अभिव्यक्ति

साइटोप्लाज्मिक अभिव्यक्ति तब देखी जाती है जब धुंधलापन पूरे क्षेत्र में वितरित हो जाता है कोशिका द्रव्य, कोशिका का वह भाग जो चारों ओर से घिरा हुआ है नाभिक और इसमें विभिन्न अंगक और साइटोस्केलेटन शामिल हैं।
साइटोप्लाज्मिक अभिव्यक्ति दिखाने वाले प्रोटीन के उदाहरणों में एंजाइम, संरचनात्मक प्रोटीन और कुछ सिग्नलिंग अणु शामिल हैं। एक उदाहरण शामिल है साइटोकैटिन्स, जो उपकला कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में पाए जाने वाले मध्यवर्ती फिलामेंट प्रोटीन हैं।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री साइटोप्लाज्मिक अभिव्यक्ति

साइटोप्लाज्मिक धुंधलापन उन कोशिकाओं की पहचान करने में मदद करता है जो चयापचय, सिग्नलिंग या सेलुलर संरचना में शामिल विशिष्ट प्रोटीन का उत्पादन कर रहे हैं। यह जानकारी ट्यूमर के निदान और वर्गीकरण, चयापचय रोगों को समझने और संक्रामक एजेंटों की पहचान करने के लिए महत्वपूर्ण हो सकती है।

झिल्लीदार अभिव्यक्ति

झिल्लीदार अभिव्यक्ति उस धुंधलापन को संदर्भित करती है जो कोशिका झिल्ली में स्थानीयकृत होती है, वह सीमा जो कोशिका को उसके बाहरी वातावरण से अलग करती है और अन्य कोशिकाओं और बाह्य मैट्रिक्स के साथ संचार में मध्यस्थता करती है। झिल्लीदार अभिव्यक्ति दिखाने वाले प्रोटीन के उदाहरणों में झिल्ली रिसेप्टर्स, ट्रांसपोर्टर और कोशिका आसंजन अणु शामिल हैं। एक प्रसिद्ध उदाहरण है HER2/neu कुछ स्तन कैंसरों में अतिअभिव्यक्ति, जहां HER2 प्रोटीन को एक झिल्लीदार धुंधला पैटर्न के रूप में पाया जाता है।

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री झिल्लीदार अभिव्यक्ति

बाह्यकोशिकीय संकेतों पर प्रतिक्रिया करने वाली या कोशिका-कोशिका या कोशिका-मैट्रिक्स अंतःक्रिया में शामिल कोशिकाओं की पहचान करने के लिए झिल्लीदार धुंधलापन विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। ऑन्कोलॉजी में, विशिष्ट झिल्ली प्रोटीन की उपस्थिति ट्यूमर की आक्रामकता और लक्षित उपचारों के प्रति इसकी संवेदनशीलता का संकेत दे सकती है।

नैदानिक ​​विकृति विज्ञान में इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के अनुप्रयोग में अभिव्यक्ति के इन पैटर्न को समझना मौलिक है। यह रोगविज्ञानियों को सटीक निदान करने, रोगों के पैथोफिज़ियोलॉजी को समझने और उपचार रणनीतियों को सूचित करने में सक्षम बनाता है। उदाहरण के लिए, की उपस्थिति का निर्धारण ER (परमाणु अभिव्यक्ति) और HER2 स्तन कैंसर कोशिकाओं में (झिल्लीदार अभिव्यक्ति) क्रमशः हार्मोन थेरेपी और लक्षित थेरेपी पर निर्णय लेने के लिए महत्वपूर्ण है।

सामान्य इम्यूनोहिस्टोकेमिकल मार्कर

CD34
साइटोकैटिन 7 (CK7)
साइटोकैटिन 20 (CK20)
Desmin
एस्ट्रोजन रिसेप्टर (ईआर)
GATA -3
की-67
एमआईबी-1
p16
p63
p53
p40
प्रोजेस्टेरोन रिसेप्टर (पीआर)
S100
एसओएक्स-10
टीटीएफ -1

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