Imunohistokemija (IHC)

Imunohistokemija (IHC) široko je korišten laboratorijski test koji uključuje upotrebu antitijela za otkrivanje specifičnih antigena (proteina) u stanicama unutar dijelova tkiva. Patolozi koriste ovaj test kako bi vidjeli distribuciju i lokalizaciju specifičnih proteina unutar različitih dijelova tkiva, čime pružaju vrijedne dijagnostičke, prognostičke i prediktivne informacije.

Kako funkcionira imunohistokemija?

Načelo iza imunohistokemije temelji se na specifičnom afinitetu vezanja između protutijela i njegovog antigena. Protutijelo je dizajnirano da cilja i veže se na određeni protein od interesa unutar uzorka tkiva. Jednom vezana, ova se interakcija vizualizira pomoću sustava detekcije, što rezultira obojenim ili fluorescentnim signalom koji se može vidjeti pod mikroskopom.

Koraci uključeni u imunohistokemiju

1. Priprema uzorka: Uzorci tkiva se prikupljaju, često kroz biopsija ili kirurški resekcija, a zatim fiksiran kako bi se očuvala arhitektura tkiva. Formalin je često korišten fiksativ. Tkivo je ugrađeno u parafinski vosak kako bi se olakšalo rezanje.
2. Rezanje: Parafinski blok tkiva reže se na tanke dijelove (obično debljine 4-5 mikrometara) pomoću mikrotoma. Ovi se dijelovi stavljaju na mikroskopska stakalca radi bojenja.
3. Deparafinizacija i rehidracija: Stakalca se tretiraju kako bi se uklonio parafin i rehidrirala tkiva, obično upotrebom ksilena (ili alternativa) nakon čega slijede alkoholi.
4. Vraćanje antigena: Mnogi antigeni postaju maskirani tijekom procesa fiksacije. Dohvaćanje antigena uključuje tretiranje dijelova toplinom ili enzimima kako bi se otkrila ta antigenska mjesta, čineći ih dostupnima antitijelima.
5. Blokiranje: nespecifična vezna mjesta blokiraju se pomoću otopine proteina kako bi se spriječilo nespecifično vezanje primarnog antitijela, što bi moglo dovesti do lažno pozitivnih rezultata.
6. Primarna inkubacija antitijela: Predmetno staklo se inkubira s primarnim antitijelom koje je specifično za antigen od interesa. Ovaj korak omogućuje antitijelu da se veže za ciljni antigen u tkivu.
7. Detekcija: Nakon ispiranja svih nevezanih primarnih protutijela, dodaje se sekundarno protutijelo. Ovo antitijelo je konjugirano s enzimom (kao što je peroksidaza hrena ili alkalna fosfataza) ili fluorescentnom oznakom i dizajnirano je da se veže na primarno antitijelo. Prisutnost sekundarnog protutijela zatim se vizualizira putem kolorimetrijske reakcije (u slučaju enzimski konjugiranih protutijela) ili fluorescencije (u slučaju fluorescentno obilježenih protutijela). Za kolorimetrijsku detekciju dodaje se supstrat koji enzim pretvara u vidljivi obojeni produkt na mjestu interakcije antigen-antitijelo.
8. Suprotno bojenje: kako bi se poboljšala vizualizacija strukture tkiva, obično se na predmetno stakalce nanosi blaga kontrastna boja (npr. hematoksilin). jezgre s kontrastnom bojom.
9. Montaža i vizualizacija: predmetno stakalce se prekrije pokrovnim stakalcem, a obojeno tkivo pregledava se pod svjetlosnim ili fluorescentnim mikroskopom. Lokalizacija, intenzitet i uzorak bojenja daju uvid u prisutnost i distribuciju antigena unutar tkiva.

Aplikacije

Imunohistokemija je ključna u dijagnostičkoj patologiji za identifikaciju vrste i podrijetla stanica raka, dijagnosticiranje zaraznih bolesti i razlikovanje stanja sličnog izgleda.

Svojom sposobnošću specifične identifikacije proteina unutar složene arhitekture tkiva, imunohistokemija je postala nezamjenjiv alat u patologiji, značajno utječući na dijagnostiku, prognostiku i razvoj ciljanih terapija.

Obrasci ekspresije u imunohistokemiji

U imunohistokemiji, obrasci bojenja - jezgri, citoplazmatski i membranski - odnose se na lokalizaciju antigena (proteina) unutar različitih odjeljaka stanice. Svaki uzorak pruža vrijedan uvid u funkciju proteina i vrstu stanice koja eksprimira protein.

Nuklearna ekspresija

Do ekspresije jezgre dolazi kada je IHC bojenje lokalizirano na stanici jezgro, gdje se odvija sinteza DNA i RNA, a nalaze se i mnogi regulatorni proteini. Primjeri proteina koji pokazuju nuklearnu ekspresiju uključuju faktore transkripcije, nuklearne receptore i proteine ​​uključene u replikaciju i popravak DNK. Na primjer, estrogenski receptor (ER) u stanicama raka dojke pokazuje nuklearno bojenje jer djeluje kao faktor transkripcije koji regulira ekspresiju gena.

Nuklearno bojenje značajno je u dijagnosticiranju bolesti koje uključuju promjene u ekspresiji gena ili regulaciji staničnog ciklusa. Osobito je važno kod karcinoma gdje prisutnost ili odsutnost nuklearnih proteina, kao što su hormonski receptori, može usmjeravati odluke o liječenju.

Citoplazmatska ekspresija

Ekspresija citoplazme opaža se kada je boja raspoređena po cijeloj površini citoplazma, dio stanice koji okružuje jezgro a sadrži razne organele i citoskelet.
Primjeri proteina koji pokazuju citoplazmatsku ekspresiju uključuju enzime, strukturne proteine ​​i određene signalne molekule. Primjer uključuje Citokeratini, koji su međuproteini filamenta koji se nalaze u citoplazmi epitelnih stanica.

Bojanje citoplazme pomaže identificirati stanice koje proizvode specifične proteine ​​uključene u metabolizam, signalizaciju ili staničnu strukturu. Ove informacije mogu biti ključne za dijagnosticiranje i klasifikaciju tumora, razumijevanje metaboličkih bolesti i identifikaciju uzročnika infekcije.

Membranozna ekspresija

Membranozna ekspresija odnosi se na bojenje koje je lokalizirano na staničnoj membrani, granici koja odvaja stanicu od vanjskog okoliša i posreduje u komunikaciji s drugim stanicama i izvanstaničnim matriksom. Primjeri proteina koji pokazuju membransku ekspresiju uključuju membranske receptore, transportere i molekule stanične adhezije. Poznati primjer je HER2/neu prekomjerna ekspresija u određenim vrstama raka dojke, gdje se protein HER2 detektira kao membranski uzorak bojenja.

Membransko bojenje je osobito važno za identifikaciju stanica koje reagiraju na izvanstanične signale ili sudjeluju u interakcijama stanica-stanica ili stanica-matriks. U onkologiji, prisutnost specifičnih membranskih proteina može ukazivati ​​na agresivnost tumora i njegovu osjetljivost na ciljane terapije.

Razumijevanje ovih obrazaca ekspresije temeljno je u primjeni imunohistokemije u dijagnostičkoj patologiji. Omogućuje patolozima postavljanje preciznih dijagnoza, razumijevanje patofiziologije bolesti i informiranje o strategijama liječenja. Na primjer, određivanje prisutnosti ER (nuklearna ekspresija) i HER2 (membranska ekspresija) u stanicama raka dojke ključna je za donošenje odluke o hormonskoj terapiji, odnosno ciljanoj terapiji.

Uobičajeni imunohistokemijski markeri

CD34

citokeratin 7 (CK7)

citokeratin 20 (CK20)

Desmin

Estrogenski receptor (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Progesteronski receptor (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

O ovom članku

Liječnici su napisali ovaj članak kako bi vam pomogli da pročitate i razumijete svoje patološko izvješće. Kontaktirajte nas ako imate pitanja o ovom članku ili vašem patološkom izvješću. Za potpuni uvod u vaše patološko izvješće pročitajte ovaj članak.

Drugi korisni resursi

Atlas patologije