Ónæmisvefjaefnafræði (IHC)

Ónæmisvefjaefnafræði (IHC) er mikið notað rannsóknarstofupróf sem felur í sér notkun mótefna til að greina sérstaka mótefnavaka (prótein) í frumum innan vefjahluta. Meinafræðingar nota þetta próf til að sjá dreifingu og staðsetningu tiltekinna próteina innan mismunandi hluta vefja og veita þar með dýrmætar greiningar-, spá- og forspárupplýsingar.

Hvernig virkar ónæmisvefjafræði?

Meginreglan á bak við ónæmisvefjafræði byggir á sértækri bindishækni milli mótefnis og mótefnavaka þess. Mótefnið er hannað til að miða á og bindast ákveðnu próteini sem vekur áhuga innan vefjasýnisins. Þegar það hefur verið bundið er þessi víxlverkun sýnd með því að nota greiningarkerfi, sem leiðir til litaðs eða flúrljómandi merki sem hægt er að sjá í smásjá.

Skref sem taka þátt í ónæmisvefjafræði

1. Undirbúningur sýna: Vefjasýnum er safnað, oft í gegnum vefjasýni eða skurðaðgerð brottnám, og síðan fest til að varðveita vefjaarkitektúr. Formalín er algengt festaefni. Vefurinn er felldur inn í paraffínvax til að auðvelda sneiðing.
2. Skurðskurður: Paraffin-innfelldur vefjablokkur er skorinn í þunna hluta (venjulega 4-5 míkrómetrar á þykkt) með því að nota míkrótóm. Þessir hlutar eru settir á smásjárgler til litunar.
3. Afparaffínvæðing og endurvötnun: Glerarnir eru meðhöndlaðir til að fjarlægja paraffínið og endurvökva vefina, venjulega með því að nota xýlen (eða aðra valkosti) og síðan flokkuð alkóhól.
4. Endurheimt mótefnavaka: Margir mótefnavakar verða dulaðir á meðan á festingarferlinu stendur. Endurheimt mótefnavaka felur í sér að meðhöndla hlutana með hita eða ensímum til að fletta ofan af þessum mótefnavakastöðum, sem gerir þá aðgengilega mótefnum.
5. Lokun: Ósérhæfðir bindistaðir eru lokaðir með því að nota próteinlausn til að koma í veg fyrir að aðal mótefnið bindist ósértækt, sem gæti leitt til rangt-jákvæðra niðurstaðna.
6. Ræktun frummótefna: Glerið er ræktað með frummótefni sem er sértækt fyrir mótefnavakann sem vekur áhuga. Þetta skref gerir mótefninu kleift að bindast markmótefnavakanum í vefnum.
7. Greining: Eftir að öll óbundin frummótefni hafa verið þvegin í burtu er aukamótefni bætt við. Þetta mótefni er samtengt við ensím (eins og piparrótarperoxídasa eða basískan fosfatasa) eða flúrljómandi merki og er hannað til að bindast aðalmótefninu. Tilvist annars mótefnisins er síðan sýnd með litamælingu (ef um er að ræða ensímtengd mótefni) eða flúrljómun (ef um er að ræða flúrljómandi merkt mótefni). Til að greina litamælingar er hvarfefni bætt við sem ensímið breytir í sýnilega, litaða vöru á staðnum þar sem mótefnavaka-mótefnasamspilið er.
8. Mótlitun: Til að auka mynd af vefjabyggingunni er vægur mótlitun (td hematoxylin) venjulega settur á rennibrautina, litunarfrumu kjarna með andstæðum lit.
9. Uppsetning og sýn: Glerið er þakið hyljari og litaður vefurinn er skoðaður í ljós- eða flúrsmásjá. Staðsetning, styrkleiki og mynstur litunar veitir innsýn í nærveru og dreifingu mótefnavakans innan vefsins.

Umsóknir

Ónæmisvefjaefnafræði er lykilatriði í meinafræðigreiningu til að bera kennsl á gerð og uppruna krabbameinsfrumna, greina smitsjúkdóma og greina á milli svipaðra aðstæðna.

Með getu sinni til að bera kennsl á prótein í flóknum arkitektúr vefja hefur ónæmisvefjafræði orðið ómissandi tæki í meinafræði, sem hefur veruleg áhrif á greiningu, spár og þróun markvissra meðferða.

Tjáningarmynstur í ónæmisvefjafræði

Í ónæmisvefjaefnafræði vísar litunarmynstrið - kjarna, umfrymi og himnu - til staðsetningar mótefnavakans (prótein) innan mismunandi hólfa frumunnar. Hvert mynstur gefur dýrmæta innsýn í virkni próteinsins og tegund frumunnar sem tjáir próteinið.

Kjarnatjáning

Kjarnatjáning á sér stað þegar IHC litunin er staðbundin við frumuna kjarninn, þar sem myndun DNA og RNA á sér stað og mörg stjórnprótein eru staðsett. Dæmi um prótein sem sýna kjarnatjáningu eru umritunarþættir, kjarnaviðtakar og prótein sem taka þátt í afritun og viðgerð DNA. Til dæmis sýnir estrógenviðtakinn (ER) í brjóstakrabbameinsfrumum kjarnalitun vegna þess að hann virkar sem umritunarþáttur sem stjórnar genatjáningu.

Kjarnalitun er mikilvæg við greiningu á sjúkdómum sem fela í sér breytingar á genatjáningu eða frumuhringsstjórnun. Það er sérstaklega mikilvægt í krabbameinum þar sem tilvist eða fjarvera kjarnapróteina, svo sem hormónaviðtaka, getur stýrt ákvörðunum um meðferð.

Umfrymistjáning

Frumfrymistjáning sést þegar litunin dreifist um allt umfrymi, sá hluti frumunnar sem umlykur kjarninn og inniheldur ýmis frumulíffæri og frumubeinagrind.
Dæmi um prótein sem sýna umfrymistjáningu eru ensím, byggingarprótein og ákveðnar boðsameindir. Dæmi felur í sér cýtókeratín, sem eru milliþráðarprótein sem finnast í umfrymi þekjufrumna.

Umfrymislitun hjálpar til við að bera kennsl á frumur sem eru að framleiða ákveðin prótein sem taka þátt í efnaskiptum, merkjasendingum eða frumubyggingu. Þessar upplýsingar geta skipt sköpum til að greina og flokka æxli, skilja efnaskiptasjúkdóma og greina smitefni.

Membranísk tjáning

Himnutjáning vísar til litunar sem er staðbundin við frumuhimnuna, mörkin sem skilja frumuna frá ytra umhverfi hennar og miðla samskiptum við aðrar frumur og utanfrumufylki. Dæmi um prótein sem sýna himnutjáningu eru himnuviðtakar, flutningsefni og frumuviðloðun sameindir. Þekkt dæmi er HER2/nei oftjáning í ákveðnum brjóstakrabbameinum, þar sem HER2 prótein er greint sem himnulitunarmynstur.

Himnulitun er sérstaklega mikilvæg til að bera kennsl á frumur sem bregðast við utanfrumuboðum eða taka þátt í frumu-frumu- eða frumu-fylkissamskiptum. Í krabbameinslækningum getur tilvist sérstakra himnupróteina bent til árásargirni æxlis og næmi þess fyrir markvissri meðferð.

Skilningur á þessum tjáningarmynstri er grundvallaratriði í beitingu ónæmisvefjaefnafræði í meinafræðigreiningum. Það gerir meinafræðingum kleift að gera nákvæmar greiningar, skilja meinalífeðlisfræði sjúkdóma og upplýsa um meðferðaraðferðir. Til dæmis að ákvarða tilvist ER (kjarnatjáning) og HER2 (himnutjáning) í brjóstakrabbameinsfrumum skiptir sköpum fyrir ákvörðun um hormónameðferð og markvissa meðferð, í sömu röð.

Algeng ónæmisvefjafræðileg merki

CD34

Cytokeratin 7 (CK7)

Cytokeratin 20 (CK20)

Desmin

Estrógenviðtaki (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Prógesterónviðtakar (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

Um þessa grein

Læknar skrifuðu þessa grein til að hjálpa þér að lesa og skilja meinafræðiskýrsluna þína. Hafðu samband ef þú hefur spurningar um þessa grein eða meinafræðiskýrsluna þína. Til að fá heildarkynningu á meinafræðiskýrslunni þinni skaltu lesa þessi grein.

Önnur gagnleg úrræði

Atlas meinafræði