אימונוהיסטוכימיה (IHC) היא בדיקת מעבדה בשימוש נרחב הכוללת שימוש בנוגדנים כדי לזהות אנטיגנים (חלבונים) ספציפיים בתאים בתוך חלקי רקמה. פתולוגים משתמשים בבדיקה זו כדי לראות את ההפצה והלוקליזציה של חלבונים ספציפיים בתוך חלקים שונים של רקמה, ובכך מספקים מידע אבחנתי, פרוגנוסטי וחיזוי רב ערך.
איך עובדת אימונוהיסטוכימיה?
העיקרון מאחורי אימונוהיסטוכימיה מבוסס על זיקת הקישור הספציפית בין נוגדן לאנטיגן שלו. הנוגדן נועד לכוון ולהיקשר לחלבון ספציפי של עניין בתוך דגימת הרקמה. לאחר החיבור, אינטראקציה זו מוצגת באמצעות מערכת זיהוי, וכתוצאה מכך אות צבעוני או ניאון שניתן לראות תחת מיקרוסקופ.
שלבים המעורבים באימונוהיסטוכימיה
- הכנת דגימה: דגימות רקמות נאספות, לעתים קרובות דרך ביופסיה או כירורגי כְּרִיתָה, ולאחר מכן קבוע כדי לשמר את ארכיטקטורת הרקמה. פורמלין הוא חומר מקבע נפוץ. הרקמה משובצת בשעווה פרפין כדי להקל על החתך.
- חיתוך: גוש הרקמה המוטבע בפרפין נחתך למקטעים דקים (בדרך כלל בעובי 4-5 מיקרומטר) באמצעות מיקרוטום. חלקים אלה מונחים על שקופיות מיקרוסקופ לצביעה.
- דה-פראפין והידרציה: השקופיות מטופלות כדי להסיר את הפרפין ולהחדיר מחדש את הרקמות, בדרך כלל באמצעות קסילן (או חלופות) ואחריו אלכוהול מדורג.
- שליפת אנטיגנים: אנטיגנים רבים הופכים למסווה במהלך תהליך הקיבוע. שליפת אנטיגן כרוכה בטיפול במקטעים בחום או באנזימים כדי לחשוף את האתרים האנטיגנים הללו, מה שהופך אותם לנגישים לנוגדנים.
- חסימה: אתרי קישור לא ספציפיים נחסמים באמצעות תמיסת חלבון כדי למנוע מהנוגדן הראשוני להיקשר באופן לא ספציפי, מה שעלול להוביל לתוצאות חיוביות שגויות.
- דגירת נוגדנים ראשוני: השקופית מודגרת עם נוגדן ראשוני הספציפי לאנטיגן המעניין. שלב זה מאפשר לנוגדן להיקשר לאנטיגן היעד שלו ברקמה.
- זיהוי: לאחר שטיפת כל נוגדן ראשוני לא קשור, מתווסף נוגדן משני. נוגדן זה מצומד לאנזים (כמו פרוקסידאז חזרת או פוספטאז אלקליין) או תווית פלורסנטית ונועד להיקשר לנוגדן הראשוני. נוכחותו של הנוגדן המשני מוצגת לאחר מכן באמצעות תגובה קולורימטרית (במקרה של נוגדנים מצומדים באנזים) או פלואורסצנטיות (במקרה של נוגדנים מסומנים פלואורסצנטי). לזיהוי קולורימטרי, מוסיפים מצע שהאנזים הופך למוצר גלוי וצבעוני באתר האינטראקציה של אנטיגן-נוגדן.
- צביעה נגדית: כדי לשפר את ההדמיה של ארכיטקטורת הרקמה, כתם נגד עדין (למשל, המטוקסילין) מוחל בדרך כלל על תא המכתים של השקופית גרעינים עם צבע מנוגד.
- הרכבה והדמיה: השקופית מכוסה בכיסוי, והרקמה המוכתמת נבדקת במיקרוסקופ אור או פלואורסצנטי. הלוקליזציה, העוצמה והדפוס של הצביעה מספקים תובנות לגבי הנוכחות וההפצה של האנטיגן בתוך הרקמה.
יישומים
אימונוהיסטוכימיה מסייעת בפתולוגיה אבחנתית לזיהוי סוג ומקורם של תאים סרטניים, אבחון מחלות זיהומיות והבחנה בין מצבים דומים למראה.
בזכות יכולתה לזהות חלבונים באופן ספציפי בתוך הארכיטקטורה המורכבת של רקמות, אימונוהיסטוכימיה הפכה לכלי הכרחי בפתולוגיה, המשפיעה באופן משמעותי על אבחון, פרוגנוסטיקה ופיתוח של טיפולים ממוקדים.
דפוסי ביטוי באימונוהיסטוכימיה
באימונוהיסטוכימיה, דפוסי הצביעה - גרעיניים, ציטופלזמיים וקרוםיים - מתייחסים ללוקליזציה של האנטיגן (חלבון) בתוך תאים שונים של התא. כל דפוס מספק תובנות חשובות לגבי תפקוד החלבון וסוג התא המבטא את החלבון.
ביטוי גרעיני
ביטוי גרעיני מתרחש כאשר צביעה IHC ממוקמת לתא גרעין, שבו מתרחשת סינתזת DNA ו-RNA, וממוקמים חלבונים מווסתים רבים. דוגמאות לחלבונים המראים ביטוי גרעיני כוללות גורמי שעתוק, קולטנים גרעיניים וחלבונים המעורבים בשכפול ותיקון DNA. לדוגמה, הקולטן לאסטרוגן (ER) בתאי סרטן השד מראה צביעה גרעינית מכיוון שהוא פועל כגורם שעתוק המווסת את ביטוי הגנים.
צביעה גרעינית היא משמעותית באבחון מחלות הכרוכות בשינויים בביטוי הגנים או בוויסות מחזור התא. זה חשוב במיוחד בסוגי סרטן שבהם נוכחות או היעדר חלבונים גרעיניים, כגון קולטני הורמונים, יכולים להנחות החלטות טיפוליות.
ביטוי ציטופלסמי
ביטוי ציטופלזמי נצפה כאשר הצביעה מתפזרת לאורך כל ציטופלזמה, החלק של התא המקיף את גרעין ומכיל אברונים שונים ושלד הציטו.
דוגמאות לחלבונים המראים ביטוי ציטופלזמי כוללות אנזימים, חלבונים מבניים ומולקולות איתות מסוימות. דוגמה כוללת ציטוקרטינים, שהם חלבוני חוט ביניים המצויים בציטופלזמה של תאי אפיתל.
צביעה ציטופלזמית עוזרת לזהות תאים שמייצרים חלבונים ספציפיים המעורבים בחילוף חומרים, איתות או מבנה תאי. מידע זה יכול להיות חיוני לאבחון וסיווג גידולים, הבנת מחלות מטבוליות וזיהוי גורמים זיהומיים.
ביטוי קרומי
ביטוי קרומי מתייחס לצביעה הממוקמת לממברנת התא, הגבול המפריד בין התא מסביבתו החיצונית ומתווך תקשורת עם תאים אחרים והמטריצה החוץ-תאית. דוגמאות לחלבונים המראים ביטוי קרומי כוללות קולטני ממברנה, טרנספורטרים ומולקולות היצמדות לתאים. דוגמה ידועה היא HER2/neu ביטוי יתר בסוגי סרטן שד מסוימים, שבהם חלבון HER2 מזוהה כדפוס צביעה קרומי.
צביעה קרומית חשובה במיוחד לזיהוי תאים המגיבים לאותות תאיים או מעורבים באינטראקציות תא-תא או תא-מטריקס. באונקולוגיה, נוכחות של חלבוני ממברנה ספציפיים יכולה להעיד על אגרסיביות של גידול ועל רגישותו לטיפולים ממוקדים.
הבנת דפוסי הביטוי הללו היא בסיסית ביישום של אימונוהיסטוכימיה בפתולוגיה אבחנתית. זה מאפשר לפתולוגים לבצע אבחנות מדויקות, להבין את הפתופיזיולוגיה של מחלות ולהודיע על אסטרטגיות טיפול. לדוגמה, קביעת נוכחות של ER (ביטוי גרעיני) ו HER2 (ביטוי קרומי) בתאי סרטן השד הוא חיוני להחלטה על טיפול הורמונלי וטיפול ממוקד, בהתאמה.
סמנים אימונוהיסטוכימיים נפוצים
CD34
ציטוקרטין 7 (CK7)
ציטוקרטין 20 (CK20)
דסמין
קולטן אסטרוגן (ER)
GATA-3
קי 67
MIB-1
p16
p63
p53
p40
קולטן פרוגסטרון (PR)
S100
SOX-10
TTF-1
על מאמר זה
רופאים כתבו מאמר זה כדי לעזור לך לקרוא ולהבין את דו"ח הפתולוגיה שלך. צרו קשר אם יש לך שאלות לגבי מאמר זה או דוח הפתולוגיה שלך. לקבלת מבוא מלא לדוח הפתולוגיה שלך, קרא את המאמר הזה.
משאבים מועילים אחרים
אטלס של פתולוגיה
העבודה שלנו נתמכת בנדיבות על ידי:
