Иммуногистохимия (ИГХ)

Иммуногистохимия (ИГХ) — это широко используемый лабораторный тест, который включает использование антител для обнаружения специфических антигенов (белков) в клетках внутри срезов тканей. Патологи используют этот тест, чтобы увидеть распределение и локализацию конкретных белков в различных частях ткани, тем самым предоставляя ценную диагностическую, прогностическую и прогностическую информацию.

Как работает иммуногистохимия?

Принцип иммуногистохимии основан на специфическом сродстве связывания между антителом и его антигеном. Антитело предназначено для нацеливания и связывания с конкретным представляющим интерес белком в образце ткани. После связывания это взаимодействие визуализируется с помощью системы обнаружения, в результате чего образуется цветной или флуоресцентный сигнал, который можно увидеть под микроскопом.

Этапы иммуногистохимии

1. Подготовка проб: Образцы тканей собираются, часто биопсия или хирургический резекция, а затем фиксируется для сохранения архитектуры ткани. Формалин – широко используемый фиксатор. Ткань заливают парафином для облегчения разреза.
2. Рассечение: залитый парафином блок ткани разрезается на тонкие срезы (обычно толщиной 4-5 микрометров) с помощью микротома. Эти срезы помещают на предметные стекла микроскопа для окрашивания.
3. Депарафинизация и регидратация: предметные стекла обрабатываются для удаления парафина и регидратации тканей, обычно с использованием ксилола (или его альтернатив), а затем спиртов определенной степени очистки.
4. Извлечение антигена. Многие антигены маскируются в процессе фиксации. Извлечение антигена включает обработку срезов нагреванием или ферментами, чтобы обнажить эти антигенные участки и сделать их доступными для антител.
5. Блокирование: сайты неспецифического связывания блокируются с помощью белкового раствора, чтобы предотвратить неспецифическое связывание первичного антитела, что может привести к ложноположительным результатам.
6. Инкубация первичных антител: предметное стекло инкубируют с первичным антителом, специфичным к интересующему антигену. Этот шаг позволяет антителу связываться с целевым антигеном в ткани.
7. Обнаружение: После отмывания несвязавшихся первичных антител добавляют вторичное антитело. Это антитело конъюгировано с ферментом (например, пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой) или флуоресцентной меткой и предназначено для связывания с первичным антителом. Присутствие вторичного антитела затем визуализируется с помощью колориметрической реакции (в случае антител, конъюгированных с ферментом) или флуоресценции (в случае флуоресцентно меченных антител). Для колориметрического обнаружения добавляется субстрат, который фермент превращает в видимый окрашенный продукт в месте взаимодействия антиген-антитело.
8. Контрастное окрашивание: для улучшения визуализации архитектуры ткани на предметное стекло обычно наносится слабое контрастное окрашивание (например, гематоксилин), окрашивающее клетки. ядра с контрастным цветом.
9. Монтаж и визуализация: предметное стекло накрывают покровным стеклом, окрашенную ткань исследуют под световым или флуоресцентным микроскопом. Локализация, интенсивность и характер окрашивания дают представление о присутствии и распределении антигена в ткани.

Приложения

Иммуногистохимия играет важную роль в диагностике патологии для определения типа и происхождения раковых клеток, диагностики инфекционных заболеваний и дифференциации схожих состояний.

Благодаря своей способности специфически идентифицировать белки в сложной архитектуре тканей иммуногистохимия стала незаменимым инструментом в патологии, существенно влияя на диагностику, прогностику и разработку таргетной терапии.

Паттерны экспрессии в иммуногистохимии

В иммуногистохимии характер окрашивания — ядерный, цитоплазматический и мембранный — относится к локализации антигена (белка) в различных компартментах клетки. Каждый образец дает ценную информацию о функции белка и типе клеток, экспрессирующих белок.

Ядерное выражение

Ядерная экспрессия происходит, когда окрашивание IHC локализуется в клетке. ядро, где происходит синтез ДНК и РНК и расположены многие регуляторные белки. Примеры белков, демонстрирующих ядерную экспрессию, включают факторы транскрипции, ядерные рецепторы и белки, участвующие в репликации и репарации ДНК. Например, рецептор эстрогена (ER) в клетках рака молочной железы демонстрирует ядерное окрашивание, поскольку он действует как фактор транскрипции, регулирующий экспрессию генов.

Окрашивание ядер имеет важное значение для диагностики заболеваний, которые включают изменения в экспрессии генов или регуляции клеточного цикла. Это особенно важно при раке, где наличие или отсутствие ядерных белков, таких как рецепторы гормонов, может определять решение о лечении.

Цитоплазматическая экспрессия

Цитоплазматическая экспрессия наблюдается, когда окрашивание распространяется по цитоплазма, часть клетки, окружающая ядро и содержит различные органеллы и цитоскелет.
Примеры белков, демонстрирующих цитоплазматическую экспрессию, включают ферменты, структурные белки и некоторые сигнальные молекулы. Пример включает в себя цитокератины, которые представляют собой белки промежуточных филаментов, обнаруженные в цитоплазме эпителиальных клеток.

Цитоплазматическое окрашивание помогает идентифицировать клетки, которые производят специфические белки, участвующие в метаболизме, передаче сигналов или клеточной структуре. Эта информация может иметь решающее значение для диагностики и классификации опухолей, понимания метаболических заболеваний и выявления инфекционных агентов.

Мембранная экспрессия

Мембранная экспрессия относится к окрашиванию, локализованному на клеточной мембране, границе, которая отделяет клетку от ее внешней среды и обеспечивает связь с другими клетками и внеклеточным матриксом. Примеры белков, демонстрирующих мембранную экспрессию, включают мембранные рецепторы, транспортеры и молекулы клеточной адгезии. Хорошо известен пример HER2 / Neu сверхэкспрессия при некоторых видах рака молочной железы, где белок HER2 обнаруживается по характеру мембранного окрашивания.

Мембранное окрашивание особенно важно для идентификации клеток, реагирующих на внеклеточные сигналы или участвующих во взаимодействиях клетка-клетка или клетка-матрикс. В онкологии наличие специфических мембранных белков может указывать на агрессивность опухоли и ее чувствительность к таргетной терапии.

Понимание этих закономерностей экспрессии имеет основополагающее значение для применения иммуногистохимии в диагностике патологии. Это позволяет патологам ставить точные диагнозы, понимать патофизиологию заболеваний и разрабатывать стратегии лечения. Например, определение наличия ER (ядерная экспрессия) и HER2 (мембранная экспрессия) в клетках рака молочной железы имеет решающее значение для принятия решения о гормональной терапии и таргетной терапии соответственно.

Общие иммуногистохимические маркеры

CD34

Цитокератин 7 (CK7)

Цитокератин 20 (CK20)

Десмин

Рецептор эстрогена (ER)

ГАТА-3

Ки-67

МИБ-1

p16

p63

p53

p40

Рецептор прогестерона (PR)

S100

СОКС-10

ТТФ-1

Об этой статье

Врачи написали эту статью, чтобы помочь вам прочитать и понять отчет о патологии. Свяжитесь с нами если у вас есть вопросы по поводу этой статьи или отчета о патологии. Полную информацию об отчете о патологии см. этой статье.

Другие полезные ресурсы

Атлас патологии