Иммуногистохимия (ИГХ): определение

Иммуногистохимия (часто сокращенно ИГХ) — это лабораторный тест, который патологи используют для обнаружения специфических белков, также известных как антигены, в клетках образца ткани. Выявляя эти белки, патологи могут лучше понять типы присутствующих клеток, их происхождение и поведение. Эта информация позволяет врачам ставить точные диагнозы, прогнозировать прогрессирование заболевания и выбирать наиболее эффективные методы лечения.

Как работает иммуногистохимия?

Иммуногистохимия использует специализированные химические вещества, известные как антитела. Эти антитела способны распознавать и связываться со специфическими белками в образце ткани. После связывания антитела с целевым белком патологоанатомы могут сделать его видимым под микроскопом, добавив краситель или флуоресцентный маркер. Это позволяет легко визуализировать местоположение белка внутри клеток.

Каковы этапы иммуногистохимии?

1. Подготовка образцов : Сначала получают образцы тканей путем биопсии или хирургического вмешательства. Для их сохранения образцы обрабатывают специальным раствором, обычно формалином, а затем заливают воскоподобным веществом, называемым парафином.

2. Нарезка : Сохраненная ткань разрезается на очень тонкие срезы (толщиной приблизительно 4-5 микрометров) и помещается на стеклянные предметные стекла микроскопа, где она подготавливается к окрашиванию.

3. Депарафинизация и регидратация : воск (парафин) удаляется с помощью специальных химических веществ, что позволяет эффективно окрашивать ткани.

4. Восстановление антигенов : Иногда белки (антигены) оказываются скрытыми в процессе подготовки тканей. Патологи обрабатывают ткани теплом или специальными ферментами, чтобы вновь обнажить эти белки, что облегчает их обнаружение антителами.

5. Блокирование : Чтобы гарантировать, что антитела связываются только с целевыми белками, патологи используют специальные белковые растворы для блокирования других нежелательных участков связывания.

6. Инкубация с первичными антителами : предметные стекла покрывают первичными антителами, которые специфически связываются с интересующим белком.

7. Обнаружение : После удаления избытка первичного антитела наносится вторичное антитело. Это второе антитело прикрепляется к первичному антителу и содержит либо фермент, либо флуоресцентный маркер. При активации оно излучает цвет или флуоресцентный свет, точно определяя местоположение целевого белка.

8. Дополнительное окрашивание : Чтобы помочь патологоанатомам четко видеть структуру ткани, добавляется слабое фоновое окрашивание (часто гематоксилином, который окрашивает ядра клеток в синий цвет).

9. Подготовка и визуализация : Наконец, препараты накрывают тонким покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Патологи отмечают характер, интенсивность и локализацию окрашивания для интерпретации результатов.

Почему иммуногистохимия важна?

Иммуногистохимия чрезвычайно ценна, поскольку она помогает патологам точно диагностировать заболевания. Она может различать различные типы раковых клеток, определять инфекции и дифференцировать заболевания, которые выглядят похожими под микроскопом. Кроме того, идентифицируя определенные белки, врачи могут определять наиболее эффективные варианты лечения, включая целевые терапии.

Что означают различные схемы окрашивания?

Когда патологи изучают иммуногистохимические слайды, они внимательно изучают распределение белков внутри клеток. Существует три основных паттерна: ядерная экспрессия, цитоплазматическая экспрессия и мембранная экспрессия. Каждый из них более подробно описан ниже.

Ядерное выражение

Ядерная экспрессия (также известная как ядерная реактивность) относится к окрашиванию, которое происходит в ядре клетки, где хранится генетический материал, такой как ДНК. Белки, находящиеся в ядре, часто участвуют в регуляции роста и поведения клеток. Например, рецептор эстрогена (ER) , белок, важный при принятии решений о лечении рака молочной железы, проявляется в виде ядерного окрашивания. Выявление ядерного окрашивания помогает врачам диагностировать определенные виды рака и определять подходящее лечение, например, гормональную терапию.

Цитоплазматическая экспрессия

Цитоплазматическая экспрессия (также известная как цитоплазматическая реактивность) происходит в цитоплазме — области вокруг ядра клетки , содержащей множество важных структур и ферментов. Белки, находящиеся здесь, обычно играют роль в метаболизме, обеспечивают структурную поддержку или способствуют внутренней передаче сигналов. Примером цитоплазматического окрашивания является присутствие цитокератинов — белков, содержащихся в клетках, выстилающих многие части тела. Этот тип окрашивания помогает определить происхождение клеток, диагностировать определенные виды рака или выявлять инфекции.

Мембранозное выражение

Мембранная экспрессия (также известная как мембранная реактивность) выявляет белки, расположенные на поверхности или мембране клетки, которые помогают клеткам взаимодействовать друг с другом и с окружающей средой. Хорошо известным примером является белок HER2 в некоторых видах рака молочной железы, который характеризуется характерным мембранным окрашиванием. Идентификация мембранных белков имеет решающее значение, поскольку она может помочь в выборе таргетной терапии, позволяя врачам подбирать лечение, адаптированное к конкретному типу рака у пациента.

Понимание этих моделей проявления помогает патологам ставить точные диагнозы, лучше прогнозировать развитие заболеваний и рекомендовать эффективные методы лечения.