Имунохистохемија (ИХЦ)

Имунохистохемија (ИХЦ) је широко коришћен лабораторијски тест који укључује употребу антитела за откривање специфичних антигена (протеина) у ћелијама унутар делова ткива. Патолози користе овај тест да виде дистрибуцију и локализацију специфичних протеина унутар различитих делова ткива, пружајући на тај начин вредне дијагностичке, прогностичке и предиктивне информације.

Како функционише имунохистохемија?

Принцип имунохистохемије заснива се на специфичном афинитету везивања између антитела и његовог антигена. Антитело је дизајнирано да циља и везује се за специфичан протеин од интереса у узорку ткива. Једном везана, ова интеракција се визуелизује помоћу система за детекцију, што резултира обојеним или флуоресцентним сигналом који се може видети под микроскопом.

Кораци укључени у имунохистохемију

1. Припрема узорка: Узорци ткива се сакупљају, често кроз биопсија или хируршки ресекција, а затим фиксиран да би се сачувала архитектура ткива. Формалин је уобичајени фиксатор. Ткиво је уграђено у парафински восак да би се олакшало сечење.
2. Секција: Блок ткива уграђен у парафин се сече на танке делове (обично дебљине 4-5 микрометара) помоћу микротома. Ови делови се стављају на микроскопске плочице за бојење.
3. Депарафинизација и рехидрација: Стакалца се третирају да би се уклонио парафин и рехидрирали ткива, обично коришћењем ксилена (или алтернатива) праћеног степенастим алкохолима.
4. Добијање антигена: Многи антигени постају маскирани током процеса фиксације. Преузимање антигена укључује третирање делова топлотом или ензимима да би се открила ова антигена места, чинећи их доступним за антитела.
5. Блокирање: Неспецифична места везивања се блокирају коришћењем раствора протеина како би се спречило неспецифично везивање примарног антитела, што би могло довести до лажно позитивних резултата.
6. Инкубација примарне антитела: плочица се инкубира са примарним антителом које је специфично за антиген од интереса. Овај корак омогућава антителу да се веже за свој циљни антиген у ткиву.
7. Детекција: Након испирања било којег невезаног примарног антитела, додаје се секундарно антитело. Ово антитело је коњуговано са ензимом (попут пероксидазе рена или алкалне фосфатазе) или флуоресцентном ознаком и дизајнирано је да се веже за примарно антитело. Присуство секундарног антитела се затим визуелизује колориметријском реакцијом (у случају ензим-коњугованих антитела) или флуоресценцијом (у случају флуоресцентно обележених антитела). За колориметријску детекцију, додаје се супстрат који ензим претвара у видљиви обојени производ на месту интеракције антиген-антитело.
8. Контрабојење: Да би се побољшала визуализација архитектуре ткива, благо контра бојење (нпр. хематоксилин) се обично наноси на стакалну ћелију за бојење језгра са контрастном бојом.
9. Монтажа и визуализација: Стакалце се прекривају покровним стакалцем, а обојено ткиво се испитује под светлосним или флуоресцентним микроскопом. Локализација, интензитет и образац бојења пружају увид у присуство и дистрибуцију антигена унутар ткива.

aplikacije

Имунохистохемија је кључна у дијагностичкој патологији за идентификацију типа и порекла ћелија рака, дијагностиковање заразних болести и разликовање стања сличног изгледа.

Својом способношћу да специфично идентификује протеине у комплексној архитектури ткива, имунохистохемија је постала незаменљив алат у патологији, значајно утичући на дијагностику, прогнозу и развој циљаних терапија.

Обрасци изражавања у имунохистохемији

У имунохистохемији, обрасци бојења — нуклеарни, цитоплазматски и мембрански — односе се на локализацију антигена (протеина) у различитим деловима ћелије. Сваки образац пружа вредан увид у функцију протеина и врсту ћелије која експресује протеин.

Нуклеарни израз

Нуклеарна експресија се јавља када је ИХЦ бојење локализовано на ћелији језгро, где долази до синтезе ДНК и РНК, а налазе се и многи регулаторни протеини. Примери протеина који показују нуклеарну експресију укључују факторе транскрипције, нуклеарне рецепторе и протеине укључене у репликацију и поправку ДНК. На пример, естрогенски рецептор (ЕР) у ћелијама рака дојке показује нуклеарно бојење јер делује као фактор транскрипције који регулише експресију гена.

Нуклеарно бојење је значајно у дијагностици болести које укључују промене у експресији гена или регулацији ћелијског циклуса. То је посебно важно код карцинома где присуство или одсуство нуклеарних протеина, као што су хормонски рецептори, може да води одлуке о лечењу.

Цитопласмиц Екпрессион

Цитоплазматска експресија се примећује када је бојење распоређено по целој површини цитоплазма, део ћелије који окружује језгро и садржи различите органеле и цитоскелет.
Примери протеина који показују цитоплазматску експресију укључују ензиме, структурне протеине и одређене сигналне молекуле. Пример укључује цитокератина, који су протеини средњег филамента који се налазе у цитоплазми епителних ћелија.

Цитоплазматско бојење помаже у идентификацији ћелија које производе специфичне протеине укључене у метаболизам, сигнализацију или ћелијску структуру. Ове информације могу бити кључне за дијагнозу и класификацију тумора, разумевање метаболичких болести и идентификацију инфективних агенаса.

Мембраноус Екпрессион

Мембранска експресија се односи на бојење које је локализовано на ћелијској мембрани, граници која одваја ћелију од њеног спољашњег окружења и посредује у комуникацији са другим ћелијама и екстрацелуларним матриксом. Примери протеина који показују мембранску експресију укључују мембранске рецепторе, транспортере и молекуле ћелијске адхезије. Познат пример је ХЕР2/неу прекомерна експресија код одређених карцинома дојке, где се ХЕР2 протеин детектује као мембрански образац бојења.

Мембранско бојење је посебно важно за идентификацију ћелија које реагују на екстрацелуларне сигнале или су укључене у интеракције ћелија-ћелија или ћелија-матрикс. У онкологији, присуство специфичних мембранских протеина може указивати на агресивност тумора и његову подложност циљаним терапијама.

Разумевање ових образаца изражавања је фундаментално у примени имунохистохемије у дијагностичкој патологији. Омогућава патолозима да поставе прецизне дијагнозе, разумеју патофизиологију болести и информишу о стратегијама лечења. На пример, утврђивање присуства ER (нуклеарни израз) и ХЕРКСНУМКС (мембранска експресија) у ћелијама рака дојке је кључна за одлучивање о хормонској терапији, односно циљаној терапији.

Уобичајени имунохистохемијски маркери

ЦДКСНУМКС

цитокератин 7 (ЦК7)

цитокератин 20 (ЦК20)

Десмин

Естрогенски рецептор (ЕР)

ГАТА-3

Ки-67

МИБ-1

пКСНУМКС

пКСНУМКС

пКСНУМКС

пКСНУМКС

Прогестеронски рецептор (ПР)

СКСНУМКС

СОКС-10

ТТФ-1

О овом чланку

Лекари су написали овај чланак како би вам помогли да прочитате и разумете свој извештај о патологији. Контактирајте нас ако имате питања о овом чланку или извештају о патологији. За потпуни увод у ваш извештај о патологији, прочитајте Овај чланак.

Други корисни извори

Атлас патологије