Immunhistokemi (IHC)

Immunhistokemi (IHC) är ett allmänt använt laboratorietest som involverar användning av antikroppar för att detektera specifika antigener (proteiner) i celler i vävnadssnitt. Patologer använder detta test för att se fördelningen och lokaliseringen av specifika proteiner inom olika delar av en vävnad, vilket ger värdefull diagnostisk, prognostisk och prediktiv information.

Hur fungerar immunhistokemi?

Principen bakom immunhistokemi är baserad på den specifika bindningsaffiniteten mellan en antikropp och dess antigen. Antikroppen är utformad för att rikta och binda till ett specifikt protein av intresse i vävnadsprovet. När den väl är bunden visualiseras denna interaktion med hjälp av ett detektionssystem, vilket resulterar i en färgad eller fluorescerande signal som kan ses under ett mikroskop.

Steg involverade i immunhistokemi

1. Provberedning: Vävnadsprover tas, ofta genom biopsi eller kirurgisk resektion, och fixeras sedan för att bevara vävnadsarkitekturen. Formalin är ett vanligt använt fixeringsmedel. Vävnaden är inbäddad i paraffinvax för att underlätta snittning.
2. Sektionering: Det paraffininbäddade vävnadsblocket skärs i tunna sektioner (vanligtvis 4-5 mikrometer tjocka) med hjälp av en mikrotom. Dessa sektioner placeras på objektglas för färgning.
3. Avparaffinering och rehydrering: Objektglasen behandlas för att ta bort paraffinet och rehydrera vävnaderna, vanligtvis med xylen (eller alternativ) följt av graderade alkoholer.
4. Antigenåtervinning: Många antigener blir maskerade under fixeringsprocessen. Antigenåtervinning innebär att sektionerna behandlas med värme eller enzymer för att exponera dessa antigena platser, vilket gör dem tillgängliga för antikroppar.
5. Blockering: Icke-specifika bindningsställen blockeras med en proteinlösning för att förhindra att den primära antikroppen binder ospecifikt, vilket kan leda till falskt positiva resultat.
6. Primär antikroppsinkubation: Objektglaset inkuberas med en primär antikropp som är specifik för antigenet av intresse. Detta steg tillåter antikroppen att binda till sitt målantigen i vävnaden.
7. Detektion: Efter tvättning av eventuell obunden primär antikropp tillsätts en sekundär antikropp. Denna antikropp är konjugerad till ett enzym (som pepparrotsperoxidas eller alkaliskt fosfatas) eller en fluorescerande märkning och är utformad för att binda till den primära antikroppen. Närvaron av den sekundära antikroppen visualiseras sedan genom en kolorimetrisk reaktion (i fallet med enzymkonjugerade antikroppar) eller fluorescens (i fallet med fluorescensmärkta antikroppar). För kolorimetrisk detektion tillsätts ett substrat som enzymet omvandlar till en synlig, färgad produkt vid platsen för antigen-antikroppsinteraktionen.
8. Motfärgning: För att förbättra visualiseringen av vävnadsarkitekturen appliceras vanligtvis en mild motfärgning (t.ex. hematoxylin) på objektglaset, färgningscellen kärnor med en kontrasterande färg.
9. Montering och visualisering: Objektglaset täcks med ett täckglas och den färgade vävnaden undersöks under ett ljus- eller fluorescerande mikroskop. Lokaliseringen, intensiteten och färgningsmönstret ger insikter om närvaron och distributionen av antigenet i vävnaden.

Tillämpningar

Immunhistokemi är avgörande för diagnostisk patologi för att identifiera typ och ursprung av cancerceller, diagnostisera infektionssjukdomar och skilja mellan liknande tillstånd.

Genom sin förmåga att specifikt identifiera proteiner inom den komplexa arkitekturen av vävnader, har immunhistokemi blivit ett oumbärligt verktyg inom patologi, vilket avsevärt påverkar diagnostik, prognostik och utveckling av riktade terapier.

Mönster för uttryck i immunhistokemi

Inom immunhistokemi hänvisar mönstren för färgning - nukleär, cytoplasmatisk och membranös - till lokaliseringen av antigenet (proteinet) i olika avdelningar i cellen. Varje mönster ger värdefulla insikter om proteinets funktion och vilken typ av cell som uttrycker proteinet.

Nukleärt uttryck

Nukleärt uttryck uppstår när IHC-färgningen är lokaliserad till cellen kärna, där DNA- och RNA-syntes förekommer, och många regulatoriska proteiner finns. Exempel på proteiner som visar nukleärt uttryck inkluderar transkriptionsfaktorer, nukleära receptorer och proteiner involverade i DNA-replikation och reparation. Till exempel visar östrogenreceptorn (ER) i bröstcancerceller nukleär färgning eftersom den fungerar som en transkriptionsfaktor som reglerar genuttryck.

Nukleär färgning är betydelsefull för att diagnostisera sjukdomar som involverar förändringar i genuttryck eller cellcykelreglering. Det är särskilt viktigt vid cancer där närvaron eller frånvaron av nukleära proteiner, såsom hormonreceptorer, kan vägleda behandlingsbeslut.

Cytoplasmatiskt uttryck

Cytoplasmatiskt uttryck observeras när färgningen är fördelad över hela cytoplasman, den del av cellen som omger kärna och innehåller olika organeller och cytoskelettet.
Exempel på proteiner som visar cytoplasmatiskt uttryck inkluderar enzymer, strukturella proteiner och vissa signalmolekyler. Ett exempel inkluderar cytokeratiner, som är mellanliggande filamentproteiner som finns i cytoplasman hos epitelceller.

Cytoplasmatisk färgning hjälper till att identifiera celler som producerar specifika proteiner involverade i metabolism, signalering eller cellstruktur. Denna information kan vara avgörande för att diagnostisera och klassificera tumörer, förstå metabola sjukdomar och identifiera smittämnen.

Membranöst uttryck

Membranuttryck avser färgning som är lokaliserad till cellmembranet, gränsen som skiljer cellen från dess yttre miljö och förmedlar kommunikation med andra celler och den extracellulära matrisen. Exempel på proteiner som visar membranuttryck inkluderar membranreceptorer, transportörer och celladhesionsmolekyler. Ett välkänt exempel är HER2/neu överuttryck i vissa bröstcancer, där HER2-protein detekteras som ett membranöst färgningsmönster.

Membranfärgning är särskilt viktig för att identifiera celler som svarar på extracellulära signaler eller involverade i cell-cell- eller cell-matris-interaktioner. Inom onkologi kan närvaron av specifika membranproteiner indikera aggressiviteten hos en tumör och dess mottaglighet för riktade terapier.

Att förstå dessa uttrycksmönster är grundläggande vid tillämpningen av immunhistokemi i diagnostisk patologi. Det gör det möjligt för patologer att ställa exakta diagnoser, förstå sjukdomars patofysiologi och informera om behandlingsstrategier. Till exempel att bestämma närvaron av ER (nukleärt uttryck) och HER2 (membranöst uttryck) i bröstcancerceller är avgörande för att besluta om hormonbehandling respektive riktad terapi.

Vanliga immunhistokemiska markörer

CD34

Cytokeratin 7 (CK7)

Cytokeratin 20 (CK20)

Desmin

Östrogenreceptor (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Progesteronreceptor (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

Om den här artikeln

Läkare skrev den här artikeln för att hjälpa dig att läsa och förstå din patologirapport. Kontakta oss om du har frågor om den här artikeln eller din patologirapport. För en fullständig introduktion till din patologirapport, läs den här artikeln.

Andra hjälpsamma resurser

Atlas av patologi