อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC)

อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) คือการทดสอบในห้องปฏิบัติการที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย ซึ่งเกี่ยวข้องกับการใช้แอนติบอดีเพื่อตรวจหาแอนติเจน (โปรตีน) ที่จำเพาะในเซลล์ภายในส่วนของเนื้อเยื่อ นักพยาธิวิทยาใช้การทดสอบนี้เพื่อดูการกระจายตัวและการแปลโปรตีนเฉพาะตำแหน่งภายในส่วนต่างๆ ของเนื้อเยื่อ ดังนั้นจึงให้ข้อมูลการวินิจฉัย การพยากรณ์โรค และการพยากรณ์ที่มีคุณค่า

อิมมูโนฮิสโตเคมีทำงานอย่างไร?

หลักการเบื้องหลังอิมมูโนฮิสโตเคมีนั้นขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ในการจับเฉพาะระหว่างแอนติบอดีกับแอนติเจนของมัน แอนติบอดีได้รับการออกแบบเพื่อกำหนดเป้าหมายและจับกับโปรตีนเฉพาะที่สนใจภายในตัวอย่างเนื้อเยื่อ เมื่อเชื่อมโยงแล้ว ปฏิกิริยานี้จะถูกมองเห็นโดยใช้ระบบการตรวจจับ ส่งผลให้เกิดสัญญาณสีหรือฟลูออเรสเซนต์ที่สามารถมองเห็นได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับอิมมูโนฮิสโตเคมี

1. การเตรียมตัวอย่าง: เก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อบ่อยครั้งผ่าน ตรวจชิ้นเนื้อ หรือการผ่าตัด การผ่าตัดจากนั้นจึงแก้ไขเพื่อรักษาสถาปัตยกรรมของเนื้อเยื่อ ฟอร์มาลินเป็นสารตรึงที่ใช้กันทั่วไป เนื้อเยื่อจะถูกฝังอยู่ในขี้ผึ้งพาราฟินเพื่อช่วยในการแบ่งส่วน
2. การแบ่งส่วน: บล็อกทิชชู่ที่ฝังพาราฟินจะถูกตัดเป็นส่วนบางๆ (ปกติจะหนา 4-5 ไมโครเมตร) โดยใช้ไมโครโตม ส่วนเหล่านี้วางอยู่บนสไลด์กล้องจุลทรรศน์เพื่อการย้อมสี
3. การแยกพาราฟินและการคืนสภาพ: สไลด์จะได้รับการบำบัดเพื่อขจัดพาราฟินและเติมน้ำให้กับเนื้อเยื่อ โดยทั่วไปจะใช้ไซลีน (หรือทางเลือกอื่น) ตามด้วยแอลกอฮอล์เกรด
4. การดึงแอนติเจน: แอนติเจนจำนวนมากถูกปกปิดในระหว่างกระบวนการตรึง การดึงแอนติเจนเกี่ยวข้องกับการรักษาส่วนต่างๆ ด้วยความร้อนหรือเอนไซม์เพื่อแสดงตำแหน่งแอนติเจนเหล่านี้ ทำให้สามารถเข้าถึงแอนติบอดีได้
5. การปิดกั้น: ตำแหน่งการจับที่ไม่เฉพาะเจาะจงจะถูกปิดกั้นโดยใช้สารละลายโปรตีนเพื่อป้องกันไม่ให้แอนติบอดีปฐมภูมิจับกันโดยไม่จำเพาะเจาะจง ซึ่งอาจนำไปสู่ผลลัพธ์ที่เป็นบวกลวง
6. การฟักตัวของแอนติบอดีปฐมภูมิ: สไลด์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่เฉพาะเจาะจงกับแอนติเจนที่สนใจ ขั้นตอนนี้ช่วยให้แอนติบอดีจับกับแอนติเจนเป้าหมายในเนื้อเยื่อ
7. การตรวจจับ: หลังจากล้างแอนติบอดีปฐมภูมิที่ไม่ถูกผูกไว้ออกไปแล้ว จะมีการเพิ่มแอนติบอดีทุติยภูมิ แอนติบอดีนี้เชื่อมต่อกับเอนไซม์ (เช่น ฮอสแรดิชเปอร์ออกซิเดสหรืออัลคาไลน์ฟอสฟาเตส) หรือฉลากเรืองแสง และได้รับการออกแบบให้จับกับแอนติบอดีปฐมภูมิ จากนั้นการมีอยู่ของแอนติบอดีทุติยภูมิจะถูกมองเห็นผ่านปฏิกิริยาการวัดสี (ในกรณีของแอนติบอดีที่ผันด้วยเอนไซม์) หรือการเรืองแสง (ในกรณีของแอนติบอดีที่ติดฉลากเรืองแสง) สำหรับการตรวจจับการวัดสี จะมีการเพิ่มซับสเตรตเพื่อให้เอนไซม์แปลงเป็นผลิตภัณฑ์ที่มีสีที่มองเห็นได้ ณ ตำแหน่งที่เกิดปฏิกิริยาระหว่างแอนติเจนและแอนติบอดี
8. การย้อมสี: เพื่อเพิ่มการมองเห็นสถาปัตยกรรมของเนื้อเยื่อ โดยทั่วไปจะใช้การย้อมสีแบบอ่อน (เช่น เฮมาทอกซิลิน) กับสไลด์หรือเซลล์การย้อมสี นิวเคลียส ด้วยสีที่ตัดกัน
9. การติดตั้งและการแสดงภาพ: สไลด์ถูกคลุมด้วยแผ่นปิด และตรวจสอบเนื้อเยื่อที่เปื้อนด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงหรือฟลูออเรสเซนต์ การระบุตำแหน่ง ความเข้มข้น และรูปแบบของการย้อมสีให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการมีอยู่และการแพร่กระจายของแอนติเจนภายในเนื้อเยื่อ

การใช้งาน

อิมมูโนฮิสโตเคมีเป็นเครื่องมือในการวินิจฉัยทางพยาธิวิทยาเพื่อระบุชนิดและที่มาของเซลล์มะเร็ง การวินิจฉัยโรคติดเชื้อ และการแยกความแตกต่างระหว่างสภาวะที่มีลักษณะคล้ายคลึงกัน

ด้วยความสามารถในการระบุโปรตีนโดยเฉพาะภายในสถาปัตยกรรมที่ซับซ้อนของเนื้อเยื่อ อิมมูโนฮิสโตเคมีจึงกลายเป็นเครื่องมือที่ขาดไม่ได้ในด้านพยาธิวิทยา ส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการวินิจฉัย การพยากรณ์โรค และการพัฒนาวิธีการรักษาแบบกำหนดเป้าหมาย

รูปแบบการแสดงออกทางอิมมูโนฮิสโตเคมี

ในอิมมูโนฮิสโตเคมี รูปแบบของการย้อมสี ได้แก่ นิวเคลียร์ ไซโตพลาสซึม และเยื่อหุ้มเซลล์ อ้างอิงถึงตำแหน่งของแอนติเจน (โปรตีน) ภายในช่องต่างๆ ของเซลล์ แต่ละรูปแบบให้ข้อมูลเชิงลึกที่มีคุณค่าเกี่ยวกับการทำงานของโปรตีนและประเภทของเซลล์ที่แสดงโปรตีน

การแสดงออกทางนิวเคลียร์

การแสดงออกทางนิวเคลียร์เกิดขึ้นเมื่อการย้อมสี IHC ถูกแปลเป็นภาษาท้องถิ่นไปยังเซลล์ ส่วนกลางซึ่งเกิดการสังเคราะห์ DNA และ RNA และเป็นที่ตั้งของโปรตีนควบคุมจำนวนมาก ตัวอย่างของโปรตีนที่แสดงการแสดงออกทางนิวเคลียร์ ได้แก่ ปัจจัยการถอดรหัส ตัวรับนิวเคลียร์ และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการจำลองและซ่อมแซม DNA ตัวอย่างเช่น ตัวรับฮอร์โมนเอสโตรเจน (ER) ในเซลล์มะเร็งเต้านมแสดงการย้อมสีด้วยนิวเคลียร์ เนื่องจากทำหน้าที่เป็นปัจจัยการถอดรหัสที่ควบคุมการแสดงออกของยีน

การย้อมสีด้วยนิวเคลียร์มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรคที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีนหรือการควบคุมวัฏจักรของเซลล์ มีความสำคัญอย่างยิ่งในมะเร็งที่การมีหรือไม่มีโปรตีนนิวเคลียร์ เช่น ตัวรับฮอร์โมน สามารถเป็นแนวทางในการตัดสินใจในการรักษาได้

การแสดงออกของไซโตพลาสซึม

การแสดงออกของไซโตพลาสซึมจะถูกสังเกตเมื่อมีการกระจายการย้อมสีไปทั่ว พลาสซึมซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของเซลล์ที่ล้อมรอบ ส่วนกลาง ประกอบด้วยออร์แกเนลล์และโครงร่างโครงร่างต่างๆ
ตัวอย่างของโปรตีนที่แสดงการแสดงออกของไซโตพลาสซึม ได้แก่ เอนไซม์ โปรตีนเชิงโครงสร้าง และโมเลกุลส่งสัญญาณบางชนิด ตัวอย่างได้แก่ ไซโตเคราตินซึ่งเป็นโปรตีนเส้นใยขั้นกลางที่พบในไซโตพลาสซึมของเซลล์เยื่อบุผิว

การย้อมสีไซโตพลาสซึมช่วยระบุเซลล์ที่ผลิตโปรตีนเฉพาะที่เกี่ยวข้องกับเมแทบอลิซึม การส่งสัญญาณ หรือโครงสร้างเซลล์ ข้อมูลนี้อาจมีความสำคัญในการวินิจฉัยและจำแนกเนื้องอก การทำความเข้าใจโรคเมตาบอลิซึม และการระบุสารติดเชื้อ

การแสดงออกของเมมเบรน

การแสดงออกของเมมเบรนหมายถึงการย้อมสีที่เฉพาะที่เยื่อหุ้มเซลล์ ซึ่งเป็นขอบเขตที่แยกเซลล์ออกจากสภาพแวดล้อมภายนอกและเป็นสื่อกลางในการสื่อสารกับเซลล์อื่นและเมทริกซ์นอกเซลล์ ตัวอย่างของโปรตีนที่แสดงการแสดงออกของเยื่อหุ้มรวมถึงตัวรับเมมเบรน ตัวขนส่ง และโมเลกุลการยึดเกาะของเซลล์ ตัวอย่างที่รู้จักกันดีคือ HER2/เนีย การแสดงออกมากเกินไปในมะเร็งเต้านมบางชนิด โดยที่โปรตีน HER2 ถูกตรวจพบเป็นรูปแบบการย้อมสีแบบเยื่อหุ้มเซลล์

การย้อมสีแบบเมมเบรนมีความสำคัญอย่างยิ่งในการระบุเซลล์ที่ตอบสนองต่อสัญญาณภายนอกเซลล์ หรือเกี่ยวข้องกับการโต้ตอบระหว่างเซลล์-เซลล์ หรือเมทริกซ์ของเซลล์ ในด้านเนื้องอกวิทยา การมีอยู่ของโปรตีนเมมเบรนจำเพาะสามารถบ่งบอกถึงความลุกลามของเนื้องอกและความอ่อนแอต่อการรักษาแบบกำหนดเป้าหมาย

การทำความเข้าใจรูปแบบการแสดงออกเหล่านี้เป็นพื้นฐานในการประยุกต์ใช้อิมมูโนฮิสโตเคมีในพยาธิวิทยาในการวินิจฉัย ช่วยให้นักพยาธิวิทยาสามารถวินิจฉัยได้อย่างแม่นยำ เข้าใจพยาธิสรีรวิทยาของโรค และแจ้งกลยุทธ์การรักษา เช่น การพิจารณาการมีอยู่ของ ER (การแสดงออกทางนิวเคลียร์) และ HER2 (การแสดงออกของเยื่อหุ้มเซลล์) ในเซลล์มะเร็งเต้านมมีความสำคัญต่อการตัดสินใจเลือกการรักษาด้วยฮอร์โมนและการบำบัดแบบกำหนดเป้าหมายตามลำดับ

เครื่องหมายอิมมูโนฮิสโตเคมีทั่วไป

CD34

ไซโตเคราติน 7 (CK7)

ไซโตเคราติน 20 (CK20)

เดสมิน

ตัวรับเอสโตรเจน (ER)

กาต้า-3

กีวี -67

เอ็มไอบี-1

p16

p63

p53

p40

ตัวรับโปรเจสเตอโรน (PR)

S100

SOX-10

ทีทีเอฟ-1

เกี่ยวกับบทความนี้

แพทย์เขียนบทความนี้เพื่อช่วยให้คุณอ่านและทำความเข้าใจรายงานพยาธิวิทยาของคุณ สอบถามเพิ่มเติม หากคุณมีคำถามเกี่ยวกับบทความนี้หรือรายงานพยาธิวิทยาของคุณ หากต้องการทราบข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับรายงานพยาธิวิทยาของคุณ โปรดอ่าน บทความนี้.

แหล่งข้อมูลที่เป็นประโยชน์อื่น ๆ

Atlas ของพยาธิวิทยา