İmmünohistokimya (IHC), doku kesitlerindeki hücrelerdeki spesifik antijenleri (proteinleri) saptamak için antikorların kullanımını içeren, yaygın olarak kullanılan bir laboratuvar testidir. Patologlar bu testi bir dokunun farklı kısımlarındaki belirli proteinlerin dağılımını ve lokalizasyonunu görmek için kullanır, böylece değerli teşhis, prognostik ve tahmine yönelik bilgiler sağlar.
İmmünhistokimya nasıl çalışır?
İmmünohistokimyanın ardındaki prensip, bir antikor ile onun antijeni arasındaki spesifik bağlanma afinitesine dayanmaktadır. Antikor, doku örneği içindeki spesifik bir proteini hedef alacak ve ona bağlanacak şekilde tasarlanmıştır. Bağlandıktan sonra bu etkileşim, bir tespit sistemi kullanılarak görselleştirilir ve sonuçta mikroskop altında görülebilen renkli veya floresan bir sinyal elde edilir.
İmmünohistokimyada yer alan adımlar
- Numune hazırlama: Doku numuneleri çoğunlukla biyopsi veya cerrahi rezeksiyonuve daha sonra doku mimarisini korumak için sabitlendi. Formalin yaygın olarak kullanılan bir fiksatiftir. Doku, kesiti kolaylaştırmak için parafin mumuna gömülür.
- Bölümleme: Parafine gömülmüş doku bloğu, bir mikrotom kullanılarak ince kesitlere (genellikle 4-5 mikrometre kalınlığında) kesilir. Bu bölümler boyama için mikroskop slaytlarına yerleştirilir.
- Deparafinizasyon ve rehidrasyon: Slaytlar, genellikle ksilen (veya alternatifleri) ve ardından dereceli alkoller kullanılarak parafinin uzaklaştırılması ve dokuların yeniden sulandırılması için işleme tabi tutulur.
- Antijen alımı: Birçok antijen fiksasyon işlemi sırasında maskelenir. Antijen geri kazanımı, bu antijenik bölgeleri açığa çıkarmak için bölümlerin ısı veya enzimlerle işlenmesini ve bunların antikorlar için erişilebilir olmasını içerir.
- Bloklama: Spesifik olmayan bağlanma bölgeleri, birincil antikorun spesifik olmayan şekilde bağlanmasını önlemek için bir protein çözeltisi kullanılarak bloke edilir, bu da yanlış pozitif sonuçlara yol açabilir.
- Birincil antikor inkübasyonu: Slayt, ilgilenilen antijene özgü bir birincil antikorla inkübe edilir. Bu adım, antikorun dokudaki hedef antijenine bağlanmasını sağlar.
- Tespit: Bağlanmamış birincil antikorlar yıkandıktan sonra ikincil bir antikor eklenir. Bu antikor, bir enzime (yaban turpu peroksidaz veya alkalin fosfataz gibi) veya bir floresan etikete konjuge edilir ve birincil antikora bağlanacak şekilde tasarlanmıştır. İkincil antikorun varlığı daha sonra kolorimetrik bir reaksiyon (enzimle konjuge edilmiş antikorlar durumunda) veya floresans (floresan etiketli antikorlar durumunda) yoluyla görselleştirilir. Kolorimetrik tespit için, enzimin antijen-antikor etkileşimi bölgesinde görünür, renkli bir ürüne dönüşmesini sağlayan bir substrat eklenir.
- Karşıt boyama: Doku mimarisinin görselleştirilmesini geliştirmek için, tipik olarak slayta, boyama hücresine hafif bir karşıt boyama (örn. hematoksilin) uygulanır. esaslar kontrast bir renk ile.
- Montaj ve görselleştirme: Slayt bir lamel ile kaplanır ve lekeli doku ışık veya floresan mikroskobu altında incelenir. Boyamanın lokalizasyonu, yoğunluğu ve şekli, antijenin doku içindeki varlığı ve dağılımı hakkında fikir verir.
Uygulamalar
İmmünohistokimya, kanser hücrelerinin tipini ve kökenini belirlemek, bulaşıcı hastalıkları teşhis etmek ve benzer görünen durumlar arasında ayrım yapmak için tanısal patolojide etkilidir.
Dokuların karmaşık mimarisi içindeki proteinleri spesifik olarak tanımlama yeteneği sayesinde immünohistokimya, patolojide teşhis, prognostik ve hedefe yönelik tedavilerin geliştirilmesini önemli ölçüde etkileyen vazgeçilmez bir araç haline geldi.
İmmünohistokimyada ifade kalıpları
İmmünohistokimyada boyama modelleri (nükleer, sitoplazmik ve membranöz) antijenin (protein) hücrenin farklı bölümleri içindeki lokalizasyonuna karşılık gelir. Her model, proteinin işlevi ve proteini ifade eden hücre tipi hakkında değerli bilgiler sağlar.
Nükleer ifade
IHC boyaması hücreye lokalize olduğunda nükleer ekspresyon meydana gelir çekirdekDNA ve RNA sentezinin gerçekleştiği ve birçok düzenleyici proteinin bulunduğu yerdir. Nükleer ekspresyon gösteren proteinlerin örnekleri arasında transkripsiyon faktörleri, nükleer reseptörler ve DNA replikasyonu ve onarımında rol oynayan proteinler yer alır. Örneğin meme kanseri hücrelerindeki östrojen reseptörü (ER), gen ifadesini düzenleyen bir transkripsiyon faktörü olarak görev yaptığı için nükleer boyanma gösterir.
Nükleer boyama, gen ekspresyonunda veya hücre döngüsü düzenlemesinde değişiklikler içeren hastalıkların teşhisinde önemlidir. Hormon reseptörleri gibi nükleer proteinlerin varlığının veya yokluğunun tedavi kararlarını yönlendirebildiği kanserlerde özellikle önemlidir.
Sitoplazmik İfade
Boyama tüm doku boyunca dağıldığında sitoplazmik ekspresyon gözlenir. sitoplazmahücreyi çevreleyen kısımdır çekirdek çeşitli organelleri ve hücre iskeletini içerir.
Sitoplazmik ifade gösteren proteinlerin örnekleri arasında enzimler, yapısal proteinler ve belirli sinyal molekülleri yer alır. Bir örnek şunları içerir: sitokeratinlerepitel hücrelerinin sitoplazmasında bulunan ara filament proteinleridir.
Sitoplazmik boyama, metabolizma, sinyalleme veya hücresel yapıda yer alan spesifik proteinleri üreten hücrelerin tanımlanmasına yardımcı olur. Bu bilgi, tümörlerin teşhisi ve sınıflandırılması, metabolik hastalıkların anlaşılması ve bulaşıcı ajanların tanımlanması için çok önemli olabilir.
Membranöz İfade
Membranöz ekspresyon, hücreyi dış ortamından ayıran ve diğer hücreler ve hücre dışı matris ile iletişime aracılık eden sınır olan hücre zarında lokalize olan boyamayı ifade eder. Membranöz ekspresyon gösteren proteinlerin örnekleri arasında membran reseptörleri, taşıyıcılar ve hücre yapışma molekülleri bulunur. İyi bilinen bir örnek HER2/yeni HER2 proteininin membranöz boyama modeli olarak tespit edildiği bazı meme kanserlerinde aşırı ekspresyon.
Membranöz boyama, hücre dışı sinyallere yanıt veren veya hücre-hücre veya hücre-matriks etkileşimlerinde yer alan hücrelerin tanımlanması için özellikle önemlidir. Onkolojide spesifik membran proteinlerinin varlığı, tümörün agresifliğini ve hedefe yönelik tedavilere duyarlılığını gösterebilir.
Bu ifade kalıplarını anlamak, immünohistokimyanın tanısal patolojide uygulanmasında temeldir. Patologların kesin teşhisler koymasına, hastalıkların patofizyolojisini anlamasına ve tedavi stratejileri konusunda bilgi vermesine olanak tanır. Örneğin, varlığının belirlenmesi ER (nükleer ifade) ve HER2 Meme kanseri hücrelerindeki (membranöz ekspresyon), sırasıyla hormon tedavisine ve hedefe yönelik tedaviye karar vermek için çok önemlidir.
Yaygın immünohistokimyasal belirteçler
CD34
Sitokeratin 7 (CK7)
Sitokeratin 20 (CK20)
Desmin
Östrojen reseptörü (ER)
CAT-3
ki-67
MIB-1
p16
p63
p53
p40
Progesteron reseptörü (PR)
S100
SOX-10
TTF-1
Bu makale hakkında
Doktorlar bu makaleyi patoloji raporunuzu okumanıza ve anlamanıza yardımcı olmak için yazdı. Bize ulaşın Bu makale veya patoloji raporunuz hakkında sorularınız varsa. Patoloji raporunuza tam bir giriş için, okuyun Bu makale.
Diğer yardımcı kaynaklar
Patoloji Atlası
Çalışmamız aşağıdakiler tarafından cömertçe desteklenmektedir:
