Yerinde hibridizasyon (ISH)

Yerinde hibridizasyon nedir?

In situ hibridizasyon (ISH), hücre veya dokulardaki DNA veya RNA gibi genetik materyali görmek için kullanılan bir laboratuvar testidir. Belirli genleri veya gen ürünlerini tanımlamak ve görselleştirmek ve aşağıdakiler gibi enfeksiyöz ajanları saptamak için tıpta yaygın olarak kullanılır: virüsler.

Yerinde hibridizasyon nasıl çalışır?

ISH, hedef genetik materyali tamamlayıcı (zıt) olan küçük bir etiketli genetik materyal parçasının (bir nükleik asit probu) kullanılmasını içerir. Prob, floresan boyalar, radyoaktif izotoplar veya probun hücrelerin içinde görülmesini sağlayan enzimler gibi çeşitli etiket türleri ile birleştirilebilir.

ISH gerçekleştirmek için önce bir doku örneği sabitlenir ve yapısını korumak ve hibridizasyona hazırlamak için işlenir. Doku daha sonra, varsa hedef genetik materyale bağlanan (melezleşen) etiketli prob ile inkübe edilir. Kalan prob daha sonra yıkanır ve kalan prob-hedef kombinasyonları, çeşitli yöntemlerden biri kullanılarak tespit edilir.

Farklı in situ hibridizasyon türleri nelerdir?

Dahil olmak üzere birkaç farklı ISH tekniği vardır. floresan in situ hibridizasyon (FISH), kromojenik in situ hibridizasyon (CISH) ve RNA in situ hibridizasyon (ISH-RNA). FISH ve CISH, hedef genetik materyalin konumunu görselleştirmek için sırasıyla floresan veya kromojenik etiketler kullanırken, ISH-RNA spesifik olarak hücreler veya dokular içindeki RNA moleküllerini saptar.