امیونو ہسٹو کیمسٹری (IHC)

امیونو ہسٹو کیمسٹری (IHC) ایک وسیع پیمانے پر استعمال ہونے والا لیبارٹری ٹیسٹ ہے جس میں ٹشو سیکشن کے اندر خلیوں میں مخصوص اینٹیجنز (پروٹین) کا پتہ لگانے کے لیے اینٹی باڈیز کا استعمال شامل ہے۔ پیتھالوجسٹ اس ٹیسٹ کو ٹشو کے مختلف حصوں کے اندر مخصوص پروٹین کی تقسیم اور لوکلائزیشن کو دیکھنے کے لیے استعمال کرتے ہیں، اس طرح قیمتی تشخیصی، تشخیصی، اور پیش گوئی کی معلومات فراہم کرتے ہیں۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری کیسے کام کرتی ہے؟

امیونو ہسٹو کیمسٹری کے پیچھے اصول اینٹی باڈی اور اس کے اینٹیجن کے درمیان مخصوص پابند تعلق پر مبنی ہے۔ اینٹی باڈی کو ٹشو نمونے کے اندر دلچسپی کے مخصوص پروٹین کو نشانہ بنانے اور اس سے منسلک کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ ایک بار پابند ہونے کے بعد، اس تعامل کا پتہ لگانے کے نظام کا استعمال کرتے ہوئے تصور کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں ایک رنگین یا فلوروسینٹ سگنل ہوتا ہے جسے خوردبین کے نیچے دیکھا جا سکتا ہے۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری میں شامل اقدامات

1. نمونے کی تیاری: ٹشو کے نمونے اکٹھے کیے جاتے ہیں، اکثر کے ذریعے بایپسی یا سرجیکل ریسیکشن، اور پھر ٹشو فن تعمیر کو محفوظ رکھنے کے لیے طے کیا گیا۔ فارملین عام طور پر استعمال ہونے والا فکسٹیو ہے۔ بافتوں کو پیرافین موم میں سرایت کیا جاتا ہے تاکہ سیکشننگ کی سہولت ہو۔
2. سیکشننگ: پیرافین ایمبیڈڈ ٹشو بلاک کو مائیکروٹوم کا استعمال کرتے ہوئے پتلے حصوں (عام طور پر 4-5 مائکرو میٹر موٹا) میں کاٹا جاتا ہے۔ ان حصوں کو داغ لگانے کے لیے خوردبین کی سلائیڈوں پر رکھا گیا ہے۔
3. ڈیپرافینائزیشن اور ری ہائیڈریشن: سلائیڈز کا علاج پیرافین کو ہٹانے اور ٹشوز کو ری ہائیڈریٹ کرنے کے لیے کیا جاتا ہے، عام طور پر زائلین (یا متبادل) کا استعمال کرتے ہوئے اس کے بعد درجہ بندی شدہ الکوحل۔
4. اینٹیجن کی بازیافت: طے کرنے کے عمل کے دوران بہت سے اینٹیجنز نقاب پوش ہو جاتے ہیں۔ اینٹیجن کی بازیافت میں ان اینٹیجنک سائٹس کو بے نقاب کرنے کے لیے گرمی یا انزائمز کے ساتھ حصوں کا علاج کرنا شامل ہے، جس سے وہ اینٹی باڈیز تک رسائی حاصل کر سکتے ہیں۔
5. مسدود کرنا: غیر مخصوص بائنڈنگ سائٹس کو پروٹین سلوشن کا استعمال کرتے ہوئے بلاک کیا جاتا ہے تاکہ بنیادی اینٹی باڈی کو غیر مخصوص طور پر پابند ہونے سے روکا جا سکے، جو غلط مثبت نتائج کا باعث بن سکتا ہے۔
6. پرائمری اینٹی باڈی انکیوبیشن: سلائیڈ کو ایک بنیادی اینٹی باڈی کے ساتھ لگایا جاتا ہے جو دلچسپی کے اینٹیجن سے مخصوص ہوتا ہے۔ یہ قدم اینٹی باڈی کو ٹشو میں اپنے ہدف کے اینٹیجن سے منسلک ہونے دیتا ہے۔
7. کھوج: کسی بھی غیر پابند بنیادی اینٹی باڈی کو دھونے کے بعد، ایک ثانوی اینٹی باڈی شامل کی جاتی ہے۔ یہ اینٹی باڈی ایک انزائم (جیسے ہارسریڈش پیرو آکسیڈیز یا الکلائن فاسفیٹیس) یا فلوروسینٹ لیبل کے ساتھ جوڑ دی جاتی ہے اور اسے بنیادی اینٹی باڈی سے منسلک کرنے کے لیے ڈیزائن کیا گیا ہے۔ اس کے بعد ثانوی اینٹی باڈی کی موجودگی کو رنگین رد عمل کے ذریعے تصور کیا جاتا ہے (انزائم کنجوگیٹڈ اینٹی باڈیز کی صورت میں) یا فلوروسینس (فلوریسنٹلی لیبل والے اینٹی باڈیز کی صورت میں)۔ رنگ میٹرک پتہ لگانے کے لیے، ایک سبسٹریٹ شامل کیا جاتا ہے جسے اینٹیجن-اینٹی باڈی کے تعامل کی جگہ پر انزائم ایک نظر آنے والی، رنگین مصنوعات میں بدل جاتا ہے۔
8. کاؤنٹرسٹیننگ: ٹشو آرکیٹیکچر کے تصور کو بڑھانے کے لیے، ایک ہلکا کاؤنٹر سٹین (مثال کے طور پر، ہیماتوکسیلین) عام طور پر سلائیڈ، سٹیننگ سیل پر لگایا جاتا ہے۔ نیوکلی ایک متضاد رنگ کے ساتھ.
9. ماؤنٹنگ اور ویژولائزیشن: سلائیڈ کو کور سلپ سے ڈھانپ دیا جاتا ہے، اور داغ دار ٹشو کو ہلکے یا فلوروسینٹ مائکروسکوپ کے نیچے جانچا جاتا ہے۔ لوکلائزیشن، شدت، اور داغ کا نمونہ ٹشو کے اندر اینٹیجن کی موجودگی اور تقسیم کے بارے میں بصیرت فراہم کرتا ہے۔

درخواستیں

امیونو ہسٹو کیمسٹری تشخیصی پیتھالوجی میں کینسر کے خلیات کی قسم اور اصلیت کی شناخت، متعدی بیماریوں کی تشخیص، اور ایک جیسے نظر آنے والے حالات کے درمیان فرق کرنے کے لیے اہم کردار ادا کرتی ہے۔

بافتوں کے پیچیدہ فن تعمیر کے اندر پروٹین کی خاص طور پر شناخت کرنے کی اپنی صلاحیت کے ذریعے، امیونو ہسٹو کیمسٹری پیتھالوجی میں ایک ناگزیر ذریعہ بن گیا ہے، جو تشخیص، تشخیص، اور ہدف شدہ علاج کی ترقی کو نمایاں طور پر متاثر کرتا ہے۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری میں اظہار کے نمونے۔

امیونو ہسٹو کیمسٹری میں، داغدار ہونے کے نمونے — جوہری، سائٹوپلاسمک، اور جھلی — سیل کے مختلف حصوں میں اینٹیجن (پروٹین) کی لوکلائزیشن کا حوالہ دیتے ہیں۔ ہر پیٹرن پروٹین کے کام اور پروٹین کو ظاہر کرنے والے سیل کی قسم کے بارے میں قیمتی بصیرت فراہم کرتا ہے۔

جوہری اظہار

جوہری اظہار اس وقت ہوتا ہے جب IHC کے داغ کو سیل میں مقامی کیا جاتا ہے۔ نیوکلیوجہاں ڈی این اے اور آر این اے کی ترکیب ہوتی ہے، اور بہت سے ریگولیٹری پروٹین واقع ہوتے ہیں۔ پروٹین کی مثالیں جو جوہری اظہار کو ظاہر کرتی ہیں ان میں نقل کے عوامل، نیوکلیئر ریسیپٹرز، اور ڈی این اے کی نقل اور مرمت میں شامل پروٹین شامل ہیں۔ مثال کے طور پر، چھاتی کے کینسر کے خلیوں میں ایسٹروجن ریسیپٹر (ER) جوہری داغ دکھاتا ہے کیونکہ یہ ایک نقلی عنصر کے طور پر کام کرتا ہے جو جین کے اظہار کو منظم کرتا ہے۔

نیوکلیئر سٹیننگ ان بیماریوں کی تشخیص میں اہم ہے جن میں جین کے اظہار یا سیل سائیکل ریگولیشن میں تبدیلیاں شامل ہیں۔ یہ خاص طور پر ان کینسروں میں اہم ہے جہاں جوہری پروٹین کی موجودگی یا غیر موجودگی، جیسے ہارمون ریسیپٹرز، علاج کے فیصلوں کی رہنمائی کر سکتے ہیں۔

سائٹوپلاسمک اظہار

سائٹوپلاسمک اظہار کا مشاہدہ اس وقت ہوتا ہے جب داغ کو پورے حصے میں تقسیم کیا جاتا ہے۔ سائٹوپلازم، سیل کا وہ حصہ جو گھیرے ہوئے ہے۔ نیوکلیو اور مختلف آرگنیلز اور سائٹوسکلٹن پر مشتمل ہے۔
پروٹین کی مثالیں جو سائٹوپلاسمک اظہار کو ظاہر کرتی ہیں ان میں انزائمز، ساختی پروٹین، اور کچھ سگنلنگ مالیکیول شامل ہیں۔ ایک مثال شامل ہے۔ cytokeratins، جو اپکلا خلیوں کے سائٹوپلازم میں پائے جانے والے انٹرمیڈیٹ فلیمینٹ پروٹین ہیں۔

سائٹوپلاسمک سٹیننگ ان خلیوں کی شناخت میں مدد کرتا ہے جو میٹابولزم، سگنلنگ، یا سیلولر ڈھانچے میں شامل مخصوص پروٹین تیار کر رہے ہیں۔ یہ معلومات ٹیومر کی تشخیص اور درجہ بندی کرنے، میٹابولک امراض کو سمجھنے، اور متعدی ایجنٹوں کی شناخت کے لیے اہم ہو سکتی ہے۔

جھلیوں کا اظہار

جھلیوں کے اظہار سے مراد وہ داغ ہے جو خلیے کی جھلی کے لیے مقامی ہے، وہ حد جو خلیے کو اس کے بیرونی ماحول سے الگ کرتی ہے اور دوسرے خلیات اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس کے ساتھ بات چیت میں ثالثی کرتی ہے۔ پروٹین کی مثالیں جو جھلیوں کے اظہار کو ظاہر کرتی ہیں ان میں جھلی کے رسیپٹرز، ٹرانسپورٹرز، اور سیل آسنجن مالیکیول شامل ہیں۔ ایک معروف مثال ہے۔ HER2/neu چھاتی کے بعض کینسروں میں حد سے زیادہ اظہار، جہاں HER2 پروٹین کو جھلیوں کے داغ دار نمونہ کے طور پر پایا جاتا ہے۔

جھلیوں کا داغ خاص طور پر ان خلیوں کی شناخت کے لیے اہم ہے جو ایکسٹرا سیلولر سگنلز کا جواب دیتے ہیں یا سیل سیل یا سیل میٹرکس کے تعامل میں ملوث ہوتے ہیں۔ آنکولوجی میں، مخصوص جھلی پروٹین کی موجودگی ٹیومر کی جارحیت اور ہدف شدہ علاج کے لیے اس کی حساسیت کی نشاندہی کر سکتی ہے۔

تشخیصی پیتھالوجی میں امیونو ہسٹو کیمسٹری کے اطلاق میں اظہار کے ان نمونوں کو سمجھنا بنیادی ہے۔ یہ پیتھالوجسٹ کو درست تشخیص کرنے، بیماریوں کی پیتھوفیسولوجی کو سمجھنے اور علاج کی حکمت عملیوں سے آگاہ کرنے کے قابل بناتا ہے۔ مثال کے طور پر، کی موجودگی کا تعین ER (جوہری اظہار) اور ہیرکسیم چھاتی کے کینسر کے خلیوں میں (جھلیوں کا اظہار) بالترتیب ہارمون تھراپی اور ٹارگٹڈ تھراپی کا فیصلہ کرنے کے لیے اہم ہے۔

عام امیونو ہسٹو کیمیکل مارکر

CD34

سائٹوکیرٹین 7 (سی کے 7)

سائٹوکیرٹین 20 (سی کے 20)

ڈیسمین۔

ایسٹروجن ریسیپٹر (ER)

GATA-3۔

کی 67۔

MIB-1

p16

p63

p53

p40

پروجیسٹرون رسیپٹر (پی آر)

S100

SOX-10۔

ٹی ٹی ایف 1

اس مضمون کے بارے میں

ڈاکٹروں نے یہ مضمون آپ کی پیتھالوجی رپورٹ کو پڑھنے اور سمجھنے میں آپ کی مدد کے لیے لکھا ہے۔ ہم سے رابطہ کریں اگر آپ کے پاس اس مضمون یا اپنی پیتھالوجی رپورٹ کے بارے میں سوالات ہیں۔ اپنی پیتھالوجی رپورٹ کے مکمل تعارف کے لیے، پڑھیں اس مضمون.

دوسرے مددگار وسائل

پیتھالوجی کا اٹلس