Immunhistokemi (IHC)

Immunhistokemi (IHC) er en meget brugt laboratorietest, der involverer brugen af ​​antistoffer til at påvise specifikke antigener (proteiner) i celler i vævssnit. Patologer bruger denne test til at se fordelingen og lokaliseringen af ​​specifikke proteiner inden for forskellige dele af et væv og giver derved værdifuld diagnostisk, prognostisk og forudsigelig information.

Hvordan fungerer immunhistokemi?

Princippet bag immunhistokemi er baseret på den specifikke bindingsaffinitet mellem et antistof og dets antigen. Antistoffet er designet til at målrette og binde til et specifikt protein af interesse i vævsprøven. Når den først er bundet, visualiseres denne interaktion ved hjælp af et detektionssystem, hvilket resulterer i et farvet eller fluorescerende signal, der kan ses under et mikroskop.

Trin involveret i immunhistokemi

1. Prøveforberedelse: Vævsprøver indsamles, ofte gennem biopsi eller kirurgisk resektion, og derefter fikseret for at bevare vævsarkitekturen. Formalin er et almindeligt anvendt fikseringsmiddel. Vævet er indlejret i paraffinvoks for at lette sektionering.
2. Sektionering: Den paraffinindlejrede vævsblok skæres i tynde snit (normalt 4-5 mikrometer tykke) ved hjælp af en mikrotom. Disse sektioner placeres på objektglas til farvning.
3. Afparaffinering og rehydrering: Objektglassene behandles for at fjerne paraffinen og rehydrere vævene, typisk ved hjælp af xylen (eller alternativer) efterfulgt af graderede alkoholer.
4. Antigenhentning: Mange antigener bliver maskeret under fikseringsprocessen. Antigenhentning involverer behandling af sektionerne med varme eller enzymer for at blotlægge disse antigene steder, hvilket gør dem tilgængelige for antistoffer.
5. Blokering: Ikke-specifikke bindingssteder blokeres ved hjælp af en proteinopløsning for at forhindre det primære antistof i at binde uspecifikt, hvilket kan føre til falsk-positive resultater.
6. Primær antistofinkubation: Objektglasset inkuberes med et primært antistof, der er specifikt for antigenet af interesse. Dette trin gør det muligt for antistoffet at binde til dets målantigen i vævet.
7. Påvisning: Efter vask af ubundet primært antistof tilsættes et sekundært antistof. Dette antistof er konjugeret til et enzym (som peberrodsperoxidase eller alkalisk phosphatase) eller et fluorescerende mærke og er designet til at binde til det primære antistof. Tilstedeværelsen af ​​det sekundære antistof visualiseres derefter gennem en kolorimetrisk reaktion (i tilfælde af enzymkonjugerede antistoffer) eller fluorescens (i tilfælde af fluorescensmærkede antistoffer). Til kolorimetrisk påvisning tilsættes et substrat, som enzymet omdanner til et synligt, farvet produkt på stedet for antigen-antistof-interaktionen.
8. Modfarvning: For at forbedre visualiseringen af ​​vævsarkitekturen påføres en mild modfarvning (f.eks. hæmatoxylin) typisk på objektglasset, farvningscellen kerner med en kontrastfarve.
9. Montering og visualisering: Objektglasset dækkes med et dækglas, og det farvede væv undersøges under et lys- eller fluorescerende mikroskop. Lokaliseringen, intensiteten og mønsteret af farvning giver indsigt i tilstedeværelsen og fordelingen af ​​antigenet i vævet.

Applikationer

Immunhistokemi er medvirkende til diagnostisk patologi til at identificere typen og oprindelsen af ​​kræftceller, diagnosticere infektionssygdomme og skelne mellem lignende udseende tilstande.

Gennem sin evne til specifikt at identificere proteiner inden for den komplekse arkitektur af væv, er immunhistokemi blevet et uundværligt værktøj inden for patologi, hvilket i væsentlig grad påvirker diagnostik, prognoser og udvikling af målrettede terapier.

Ekspressionsmønstre i immunhistokemi

I immunhistokemi refererer farvningsmønstrene - nuklear, cytoplasmatisk og membranøs - til lokaliseringen af ​​antigenet (proteinet) i forskellige rum i cellen. Hvert mønster giver værdifuld indsigt i proteinets funktion og den type celle, der udtrykker proteinet.

Nuklear udtryk

Nuklear ekspression opstår, når IHC-farvningen er lokaliseret til cellen kerne, hvor DNA- og RNA-syntese forekommer, og mange regulatoriske proteiner er lokaliseret. Eksempler på proteiner, der viser nukleær ekspression, omfatter transkriptionsfaktorer, nukleare receptorer og proteiner involveret i DNA-replikation og reparation. For eksempel viser østrogenreceptoren (ER) i brystkræftceller nuklear farvning, fordi den fungerer som en transkriptionsfaktor, der regulerer genekspression.

Nuklear farvning er vigtig ved diagnosticering af sygdomme, der involverer ændringer i genekspression eller cellecyklusregulering. Det er særligt vigtigt i kræftformer, hvor tilstedeværelsen eller fraværet af nukleare proteiner, såsom hormonreceptorer, kan vejlede behandlingsbeslutninger.

Cytoplasmatisk udtryk

Cytoplasmatisk ekspression observeres, når farvningen er fordelt over hele cytoplasma, den del af cellen, der omgiver kerne og indeholder forskellige organeller og cytoskelettet.
Eksempler på proteiner, der viser cytoplasmatisk ekspression, omfatter enzymer, strukturelle proteiner og visse signalmolekyler. Et eksempel omfatter cytokeratiner, som er mellemliggende filamentproteiner, der findes i epitelcellers cytoplasma.

Cytoplasmatisk farvning hjælper med at identificere celler, der producerer specifikke proteiner involveret i metabolisme, signalering eller cellulær struktur. Denne information kan være afgørende for diagnosticering og klassificering af tumorer, forståelse af stofskiftesygdomme og identifikation af infektionsstoffer.

Membranøst udtryk

Membranekspression refererer til farvning, der er lokaliseret til cellemembranen, den grænse, der adskiller cellen fra dens ydre miljø og medierer kommunikation med andre celler og den ekstracellulære matrix. Eksempler på proteiner, der viser membranekspression, omfatter membranreceptorer, transportører og celleadhæsionsmolekyler. Et velkendt eksempel er HER2/nev overekspression i visse brystkræftformer, hvor HER2-protein påvises som et membranøst farvningsmønster.

Membranfarvning er særlig vigtig for at identificere celler, der reagerer på ekstracellulære signaler eller er involveret i celle-celle- eller celle-matrix-interaktioner. I onkologi kan tilstedeværelsen af ​​specifikke membranproteiner indikere en tumors aggressivitet og dens modtagelighed for målrettede terapier.

Forståelse af disse udtryksmønstre er grundlæggende i anvendelsen af ​​immunhistokemi i diagnostisk patologi. Det gør det muligt for patologer at stille præcise diagnoser, forstå sygdommenes patofysiologi og informere om behandlingsstrategier. For eksempel at bestemme tilstedeværelsen af ER (nuklear udtryk) og HER2 (membranøs ekspression) i brystkræftceller er afgørende for beslutningen om henholdsvis hormonbehandling og målrettet behandling.

Almindelige immunhistokemiske markører

CD34

Cytokeratin 7 (CK7)

Cytokeratin 20 (CK20)

Desmin

Østrogenreceptor (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Progesteron receptor (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

Om denne artikel

Læger skrev denne artikel for at hjælpe dig med at læse og forstå din patologirapport. Kontakt os hvis du har spørgsmål til denne artikel eller din patologirapport. For en komplet introduktion til din patologirapport, læs denne artikel.

Andre nyttige ressourcer

Atlas af patologi