Hybridation in situ en fluorescence (FISH)

29 août 2023

L'hybridation in situ par fluorescence (FISH) est un test de laboratoire utilisé en pathologie pour détecter et localiser la présence ou l'absence de séquences d'ADN spécifiques sur les chromosomes. Il fonctionne en utilisant des sondes fluorescentes qui se lient uniquement aux parties du chromosome qui correspondent ou sont complémentaires à la sonde. Il est couramment utilisé dans le diagnostic du cancer et de certains syndromes génétiques.

Comment fonctionne l'hybridation in situ en fluorescence ?

1. Préparation de la sonde : une sonde fluorescente est conçue pour correspondre à la séquence d'ADN spécifique d'intérêt. Cette sonde est ensuite marquée avec un colorant fluorescent. Différentes sondes peuvent être marquées avec différents colorants pour détecter plusieurs cibles simultanément.
2. Préparation de l'échantillon : l'ADN contenu dans l'échantillon (comme les cellules provenant d'un échantillon de sang, d'une biopsie ou de coupes de tissus) est dénaturé, ce qui signifie qu'il est chauffé pour séparer l'ADN double brin en simples brins.
3. Hybridation : la sonde marquée par fluorescence est appliquée à l'échantillon, où elle recherche et se lie (s'hybride) à sa séquence d'ADN complémentaire dans le génome.
4. Lavage : Après l'hybridation, l'échantillon est lavé pour éliminer tout excès de sonde qui ne s'est pas lié à son ADN cible. Cette étape permet de réduire le signal de fond et d'améliorer la spécificité de la détection.
5. Détection : L'échantillon est examiné au microscope à fluorescence. Les sondes liées à des séquences d’ADN spécifiques émettront une fluorescence et leur emplacement pourra être visualisé et analysé.

Pourquoi ce test est-il effectué ?

La capacité de l'hybridation in situ par fluorescence à fournir des informations génétiques précises au niveau cellulaire en fait un outil précieux dans le diagnostic et la gestion des cancers et des maladies génétiques.

• Détection des anomalies chromosomiques : FISH peut identifier des mutations génétiques spécifiques, des délétions, des duplications et des translocations associées à diverses maladies et affections génétiques, notamment les cancers. Par exemple, il est largement utilisé pour détecter le chromosome Philadelphie dans la leucémie myéloïde chronique (LMC), une translocation spécifique entre les chromosomes 9 et 22.
• Diagnostic et pronostic du cancer : en identifiant les modifications génétiques spécifiques à certains types de cancer, FISH aide à diagnostiquer la maladie, à déterminer son pronostic et à sélectionner les traitements appropriés. Par exemple, il est utilisé pour détecter HER2/nouveau amplification dans le cancer du sein, ce qui peut influencer les décisions de traitement.
• Maladies génétiques : FISH est utilisé dans le diagnostic de maladies génétiques, telles que le syndrome de Down, en détectant la présence d'une copie supplémentaire du chromosome 21.

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