Гибридизация in situ (ISH)

Что такое гибридизация in situ?

Гибридизация in situ (ISH) — это лабораторный тест, используемый для выявления генетического материала, такого как ДНК или РНК, в клетках или тканях. Он обычно используется в медицине для идентификации и визуализации определенных генов или генных продуктов, а также для обнаружения инфекционных агентов, таких как вирусы.

Как работает гибридизация in situ?

ISH предполагает использование небольшого помеченного фрагмента генетического материала (зонда нуклеиновой кислоты), комплементарного (противоположного) генетическому материалу-мишени. Зонд можно комбинировать с различными типами меток, такими как флуоресцентные красители, радиоактивные изотопы или ферменты, которые позволяют увидеть зонд внутри клеток.

Для проведения ISH образец ткани сначала фиксируют и обрабатывают, чтобы сохранить его структуру и подготовить к гибридизации. Затем ткань инкубируют с меченым зондом, который прикрепляется (гибридизуется) к целевому генетическому материалу, если он присутствует. Затем оставшийся зонд смывается, а оставшиеся комбинации зонд-мишень обнаруживаются одним из нескольких методов.

Какие существуют виды гибридизации in situ?

Существует несколько различных типов методов ISH, в том числе флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), хромогенная гибридизация in situ (CISH) и гибридизация РНК in situ (ISH-RNA). FISH и CISH используют флуоресцентные или хромогенные метки, соответственно, для визуализации местоположения целевого генетического материала, в то время как ISH-RNA специфически обнаруживает молекулы РНК внутри клеток или тканей.