Immunhisztokémia (IHC)

Az immunhisztokémia (IHC) egy széles körben használt laboratóriumi vizsgálat, amely antitestek felhasználását foglalja magában a specifikus antigének (fehérjék) kimutatására a sejtekben a szövetmetszeteken belül. A patológusok ezt a tesztet arra használják, hogy lássák a specifikus fehérjék eloszlását és lokalizációját a szövet különböző részein, ezáltal értékes diagnosztikai, prognosztikai és prediktív információkat szolgáltatnak.

Hogyan működik az immunhisztokémia?

Az immunhisztokémia alapelve az antitest és antigénje közötti specifikus kötődési affinitáson alapul. Az antitestet úgy tervezték, hogy megcélozza a szövetmintában lévő, érdeklődésre számot tartó specifikus fehérjét, és ahhoz kötődjön. Miután megkötötték, ezt a kölcsönhatást egy érzékelőrendszer segítségével vizualizálják, ami színes vagy fluoreszcens jelet eredményez, amely mikroszkóp alatt látható.

Az immunhisztokémia lépései

1. Minta-előkészítés: A szövetmintákat gyűjtik, gyakran át biopszia vagy műtéti kivágás, majd rögzítjük a szöveti architektúra megőrzése érdekében. A formalin egy általánosan használt fixálószer. A szövet paraffinviaszba van ágyazva a metszés megkönnyítése érdekében.
2. Metszetkészítés: A paraffinba ágyazott szövettömböt vékony (általában 4-5 mikrométer vastag) metszetekre vágják mikrotom segítségével. Ezeket a metszeteket mikroszkóp tárgylemezeire helyezzük festés céljából.
3. Paraffinmentesítés és rehidratálás: A tárgylemezeket a paraffin eltávolítására és a szövetek rehidratálására kezelik, jellemzően xilolt (vagy alternatívákat), majd osztályozott alkoholokat használnak.
4. Antigén visszanyerése: Sok antigén elfedődik a rögzítési folyamat során. Az antigén visszanyerése magában foglalja a metszetek hőkezelését vagy enzimekkel történő kezelését, hogy feltárják ezeket az antigén helyeket, és így hozzáférhetővé váljanak az antitestek számára.
5. Blokkolás: A nem specifikus kötőhelyeket fehérjeoldattal blokkolják, hogy megakadályozzák az elsődleges antitest nem specifikus kötődését, ami hamis pozitív eredményekhez vezethet.
6. Elsődleges antitest inkubáció: A tárgylemezt a kérdéses antigénre specifikus elsődleges antitesttel inkubáljuk. Ez a lépés lehetővé teszi, hogy az antitest kötődjön a szövetben lévő célantigénjéhez.
7. Kimutatás: A meg nem kötött primer antitest lemosása után egy másodlagos antitestet adunk hozzá. Ez az antitest egy enzimhez (például a torma-peroxidázhoz vagy az alkalikus foszfatázhoz) vagy egy fluoreszcens címkéhez van konjugálva, és úgy van kialakítva, hogy kötődjön az elsődleges antitesthez. A másodlagos antitest jelenlétét ezután kolorimetriás reakcióval (enzimmel konjugált antitestek esetén) vagy fluoreszcenciával (fluoreszcensen jelölt antitestek esetén) teszik láthatóvá. A kolorimetriás kimutatáshoz szubsztrátot adnak hozzá, amelyet az enzim látható, színes termékké alakít át az antigén-antitest kölcsönhatás helyén.
8. Ellenfestés: A szöveti architektúra láthatóságának javítása érdekében általában enyhe ellenfestést (pl. hematoxilint) visznek fel a tárgylemezre, amely megfesti a sejtet. magok kontrasztos színnel.
9. Felszerelés és megjelenítés: A tárgylemezt fedőlemezzel lefedjük, és a megfestett szövetet fény- vagy fluoreszcens mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. A festés lokalizációja, intenzitása és mintázata betekintést nyújt az antigén jelenlétébe és eloszlásába a szövetben.

Alkalmazási területek

Az immunhisztokémia fontos szerepet játszik a diagnosztikai patológiában a rákos sejtek típusának és eredetének azonosításában, a fertőző betegségek diagnosztizálásában és a hasonló megjelenésű állapotok megkülönböztetésében.

Azáltal, hogy képes specifikusan azonosítani a fehérjéket a szövetek összetett architektúráján belül, az immunhisztokémia a patológiában nélkülözhetetlen eszközzé vált, jelentősen befolyásolva a diagnosztikát, a prognosztikát és a célzott terápiák fejlesztését.

Expressziós minták az immunhisztokémiában

Az immunhisztokémiában a festődés mintái – nukleáris, citoplazmatikus és membrános – az antigén (fehérje) sejt különböző részeiben való lokalizációjára utalnak. Mindegyik minta értékes betekintést nyújt a fehérje működésébe és a fehérjét expresszáló sejt típusába.

Nukleáris kifejezés

Nukleáris expresszió akkor következik be, amikor az IHC festődés a sejtben lokalizálódik atommag, ahol DNS és RNS szintézis zajlik, és számos szabályozó fehérje található. A nukleáris expressziót mutató fehérjék példái közé tartoznak a transzkripciós faktorok, nukleáris receptorok és a DNS-replikációban és -javításban részt vevő fehérjék. Például az ösztrogénreceptor (ER) az emlőráksejtekben nukleáris festődést mutat, mivel transzkripciós faktorként működik, amely szabályozza a génexpressziót.

A nukleáris festés jelentős a génexpresszió vagy a sejtciklus szabályozásának megváltozásával járó betegségek diagnosztizálásában. Különösen fontos a rákos megbetegedések esetében, ahol a nukleáris fehérjék, például a hormonreceptorok jelenléte vagy hiánya irányíthatja a kezelési döntéseket.

Citoplazmatikus expresszió

A citoplazmatikus expressziót akkor figyeljük meg, ha a festődés az egész testben eloszlik citoplazma, a sejt azon része, amely körülveszi a atommag és különféle organellumokat és citoszkeletont tartalmaz.
A citoplazmatikus expressziót mutató fehérjék példái közé tartoznak az enzimek, szerkezeti fehérjék és bizonyos jelátviteli molekulák. Egy példa tartalmazza citokeratinek, amelyek a hámsejtek citoplazmájában található köztes filamentum fehérjék.

A citoplazmatikus festés segít azonosítani azokat a sejteket, amelyek az anyagcserében, a jelátvitelben vagy a sejtszerkezetben részt vevő specifikus fehérjéket termelnek. Ezek az információk döntő fontosságúak lehetnek a daganatok diagnosztizálásában és osztályozásában, az anyagcsere-betegségek megértésében és a fertőző ágensek azonosításában.

Membrános kifejezés

A membrán expresszió a sejtmembránon lokalizált festődésre utal, amely határvonal elválasztja a sejtet külső környezetétől, és közvetíti a kommunikációt más sejtekkel és az extracelluláris mátrixszal. A membrános expressziót mutató fehérjék példái közé tartoznak a membránreceptorok, transzporterek és sejtadhéziós molekulák. Jól ismert példa az HER2/neu túlzott expresszió bizonyos emlőrákokban, ahol a HER2 fehérjét membránfestődési mintázatként mutatják ki.

A membránfestés különösen fontos az extracelluláris jelekre reagáló vagy sejt-sejt vagy sejt-mátrix kölcsönhatásokban részt vevő sejtek azonosításában. Az onkológiában specifikus membránfehérjék jelenléte jelezheti a daganat agresszivitását és a célzott terápiákra való érzékenységét.

Ezen expressziós minták megértése alapvető fontosságú az immunhisztokémia diagnosztikai patológiában történő alkalmazásában. Lehetővé teszi a patológusok számára, hogy pontos diagnózist állítsanak fel, megértsék a betegségek patofiziológiáját, és tájékozódjanak a kezelési stratégiákról. Például a jelenlétének meghatározása ER (nukleáris kifejezés) és HER2 (membrán expresszió) az emlőráksejtekben döntő fontosságú a hormonterápia, illetve a célzott terápia kiválasztásában.

Gyakori immunhisztokémiai markerek

CD34

Citokeratin 7 (CK7)

Citokeratin 20 (CK20)

Desmin

Ösztrogén receptor (ER)

GATA-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Progeszteron receptor (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

A cikkről

Az orvosok azért írták ezt a cikket, hogy segítsenek elolvasni és megérteni a patológiai jelentést. Kapcsolatfelvétel ha kérdése van ezzel a cikkel vagy patológiai jelentésével kapcsolatban. A patológiai jelentés teljes körű bemutatásához olvassa el ezt a cikket.

Egyéb hasznos források

A patológia atlasza