L'ibridazione in situ fluorescente (FISH) è un test di laboratorio utilizzato in patologia per rilevare e localizzare la presenza o l'assenza di sequenze di DNA specifiche sui cromosomi. Funziona utilizzando sonde fluorescenti che si legano solo a quelle parti del cromosoma che corrispondono o sono complementari alla sonda. È comunemente usato nella diagnosi del cancro e di alcune sindromi genetiche.
Come funziona l'ibridazione in situ con fluorescenza?
Preparazione della sonda: una sonda fluorescente è progettata per corrispondere alla specifica sequenza di DNA di interesse. Questa sonda viene quindi etichettata con un colorante fluorescente. Sonde diverse possono essere etichettate con coloranti diversi per rilevare più target contemporaneamente.
Preparazione del campione: il DNA nel campione (come le cellule di un campione di sangue, una biopsia o sezioni di tessuto) è denaturato, ovvero viene riscaldato per separare il DNA a doppio filamento in singoli filamenti.
Ibridazione: la sonda marcata con fluorescenza viene applicata al campione, dove ricerca e si lega (ibrida) alla sua sequenza di DNA complementare all'interno del genoma.
Lavaggio: dopo l'ibridazione, il campione viene lavato per rimuovere qualsiasi sonda in eccesso che non si sia legata al DNA target. Questo passaggio aiuta a ridurre il segnale di fondo e a migliorare la specificità del rilevamento.
Rilevazione: il campione viene esaminato al microscopio a fluorescenza. Le sonde che si sono legate a specifiche sequenze di DNA saranno fluorescenti e la loro posizione potrà essere visualizzata e analizzata.
Perché viene eseguito questo test?
La capacità dell'ibridazione in situ fluorescente di fornire informazioni genetiche precise a livello cellulare lo rende uno strumento inestimabile nella diagnosi e nella gestione dei tumori e delle malattie genetiche.
Rilevazione di anomalie cromosomiche: la FISH può identificare specifiche mutazioni genetiche, delezioni, duplicazioni e traslocazioni associate a varie malattie e condizioni genetiche, compresi i tumori. Ad esempio, è ampiamente utilizzato per rilevare il cromosoma Philadelphia nella leucemia mieloide cronica (LMC), una traslocazione specifica tra i cromosomi 9 e 22.
Diagnosi e prognosi del cancro: identificando i cambiamenti genetici specifici di alcuni tipi di cancro, la FISH aiuta a diagnosticare la malattia, a determinarne la prognosi e a selezionare le terapie appropriate. Ad esempio, viene utilizzato per rilevare HER2/neu amplificazione nel cancro al seno, che può influenzare le decisioni terapeutiche.
Malattie genetiche: la FISH viene utilizzata nella diagnosi di condizioni genetiche, come la sindrome di Down, rilevando la presenza di una copia extra del cromosoma 21.
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