Imunohistochimie (IHC)

Imunohistochimia (IHC) este un test de laborator utilizat pe scară largă care implică utilizarea anticorpilor pentru a detecta antigene specifici (proteine) în celulele din secțiunile de țesut. Patologii folosesc acest test pentru a vedea distribuția și localizarea proteinelor specifice în diferite părți ale unui țesut, oferind astfel informații valoroase de diagnostic, prognostic și predictiv.

Cum funcționează imunohistochimia?

Principiul din spatele imunohistochimiei se bazează pe afinitatea de legare specifică dintre un anticorp și antigenul său. Anticorpul este conceput pentru a ținti și a se lega de o proteină specifică de interes din proba de țesut. Odată legată, această interacțiune este vizualizată folosind un sistem de detectare, rezultând un semnal colorat sau fluorescent care poate fi văzut la microscop.

Etapele implicate în imunohistochimie

1. Pregătirea probei: Specimenele de țesut sunt colectate, adesea prin biopsie sau chirurgical rezecţieși apoi fixat pentru a păstra arhitectura țesuturilor. Formalina este un fixativ utilizat în mod obișnuit. Țesutul este înglobat în ceară de parafină pentru a facilita secționarea.
2. Secționare: Blocul de țesut încorporat în parafină este tăiat în secțiuni subțiri (de obicei, 4-5 micrometri grosime) folosind un microtom. Aceste secțiuni sunt plasate pe lame de microscop pentru colorare.
3. Deparafinizare și rehidratare: Lamelele sunt tratate pentru a elimina parafina și a rehidrata țesuturile, de obicei folosind xilen (sau alternative), urmate de alcooli gradați.
4. Recuperarea antigenului: Mulți antigeni devin mascați în timpul procesului de fixare. Recuperarea antigenului implică tratarea secțiunilor cu căldură sau enzime pentru a expune aceste situsuri antigenice, făcându-le accesibile anticorpilor.
5. Blocare: Siturile de legare nespecifice sunt blocate folosind o soluție proteică pentru a preveni legarea nespecifică a anticorpului primar, ceea ce ar putea duce la rezultate fals pozitive.
6. Incubarea anticorpilor primari: Lama este incubată cu un anticorp primar care este specific antigenului de interes. Această etapă permite anticorpului să se lege de antigenul țintă din țesut.
7. Detectare: După spălarea oricărui anticorp primar nelegat, se adaugă un anticorp secundar. Acest anticorp este conjugat la o enzimă (cum ar fi peroxidaza de hrean sau fosfataza alcalină) sau o etichetă fluorescentă și este proiectat să se lege de anticorpul primar. Prezența anticorpului secundar este apoi vizualizată printr-o reacție colorimetrică (în cazul anticorpilor conjugați cu enzime) sau prin fluorescență (în cazul anticorpilor marcați fluorescent). Pentru detectarea colorimetrică, se adaugă un substrat pe care enzima îl transformă într-un produs vizibil, colorat la locul interacțiunii antigen-anticorp.
8. Contracolorare: Pentru a îmbunătăți vizualizarea arhitecturii țesutului, se aplică în mod obișnuit o colorare ușoară (de exemplu, hematoxilină) pe lame, celulele colorante. nuclee cu o culoare contrastantă.
9. Montare și vizualizare: Lama este acoperită cu o lamă, iar țesutul colorat este examinat la microscop cu lumină sau fluorescent. Localizarea, intensitatea și modelul colorării oferă perspective asupra prezenței și distribuției antigenului în țesut.

aplicatii

Imunohistochimia este esențială în patologia diagnostică pentru identificarea tipului și originii celulelor canceroase, diagnosticarea bolilor infecțioase și diferențierea între condiții similare.

Prin capacitatea sa de a identifica în mod specific proteinele în arhitectura complexă a țesuturilor, imunohistochimia a devenit un instrument indispensabil în patologie, având un impact semnificativ asupra diagnosticului, prognosticului și dezvoltării de terapii țintite.

Modele de expresie în imunohistochimie

În imunohistochimie, modelele de colorare - nucleare, citoplasmatice și membranoase - se referă la localizarea antigenului (proteinei) în diferite compartimente ale celulei. Fiecare model oferă informații valoroase despre funcția proteinei și tipul de celulă care exprimă proteina.

Expresia nucleară

Expresia nucleară are loc atunci când colorarea IHC este localizată pe celulă nucleu, unde au loc sinteza ADN și ARN și sunt localizate multe proteine ​​reglatoare. Exemple de proteine ​​care prezintă expresie nucleară includ factorii de transcripție, receptorii nucleari și proteinele implicate în replicarea și repararea ADN-ului. De exemplu, receptorul de estrogen (ER) din celulele cancerului de sân prezintă colorare nucleară, deoarece acționează ca un factor de transcripție care reglează expresia genelor.

Colorația nucleară este semnificativă în diagnosticarea bolilor care implică modificări ale expresiei genelor sau reglării ciclului celular. Este deosebit de important în cancerele în care prezența sau absența proteinelor nucleare, cum ar fi receptorii hormonali, poate ghida deciziile de tratament.

Expresia citoplasmatică

Expresia citoplasmatică este observată atunci când colorarea este distribuită pe tot citoplasma, partea celulei care înconjoară nucleu și conține diverse organite și citoscheletul.
Exemple de proteine ​​care prezintă expresie citoplasmatică includ enzime, proteine ​​structurale și anumite molecule de semnalizare. Un exemplu include citocheratine, care sunt proteine ​​de filament intermediar găsite în citoplasma celulelor epiteliale.

Colorarea citoplasmatică ajută la identificarea celulelor care produc proteine ​​specifice implicate în metabolism, semnalizare sau structura celulară. Aceste informații pot fi cruciale pentru diagnosticarea și clasificarea tumorilor, înțelegerea bolilor metabolice și identificarea agenților infecțioși.

Expresia membranoasă

Expresia membranoasă se referă la colorarea care este localizată pe membrana celulară, granița care separă celula de mediul său extern și mediază comunicarea cu alte celule și matricea extracelulară. Exemple de proteine ​​care prezintă expresie membranoasă includ receptorii membranari, transportorii și moleculele de adeziune celulară. Un exemplu binecunoscut este HER2/neu supraexpresia în anumite tipuri de cancer de sân, unde proteina HER2 este detectată ca model de colorare membranoasă.

Colorarea membranoasă este deosebit de importantă pentru identificarea celulelor care răspund la semnale extracelulare sau implicate în interacțiuni celulă-celulă sau celulă-matrice. În oncologie, prezența proteinelor membranare specifice poate indica agresivitatea unei tumori și susceptibilitatea acesteia la terapii țintite.

Înțelegerea acestor modele de expresie este fundamentală în aplicarea imunohistochimiei în patologia diagnostică. Acesta permite patologilor să facă diagnostice precise, să înțeleagă fiziopatologia bolilor și să informeze strategiile de tratament. De exemplu, determinarea prezenței ER (expresie nucleară) și HER2 (expresia membranoasă) în celulele cancerului de sân este crucială pentru a decide asupra terapiei hormonale și, respectiv, a terapiei țintite.

Markeri imunohistochimici comuni

CD34

Citokeratina 7 (CK7)

Citokeratina 20 (CK20)

Desmin

receptor de estrogen (ER)

CAT-3

Ki-67

MIB-1

p16

p63

p53

p40

Receptorul de progesteron (PR)

S100

SOX-10

TTF-1

Despre acest articol

Medicii au scris acest articol pentru a vă ajuta să citiți și să înțelegeți raportul dumneavoastră de patologie. Contact dacă aveți întrebări despre acest articol sau raportul dumneavoastră de patologie. Pentru o introducere completă a raportului dumneavoastră de patologie, citiți acest articol.

Alte resurse utile

Atlas de patologie