Citometria a flusso: definizione

In un referto di anatomia patologica, il termine "flusso" si riferisce solitamente a un test di laboratorio chiamato citometria a flusso . Questo test viene utilizzato per analizzare le singole cellule in un campione di sangue, midollo osseo, linfonodo o altro fluido o tessuto corporeo. La citometria a flusso consente agli anatomopatologi di esaminare diverse caratteristiche delle cellule, come le loro dimensioni, la forma e le proteine ​​che esprimono, facendole passare attraverso una macchina che utilizza laser e rilevatori per analizzare ciascuna cellula.

La citometria a flusso è particolarmente importante nella diagnosi e nel monitoraggio dei tumori del sangue, tra cui leucemia e linfoma, nonché nella valutazione dei disturbi del sistema immunitario, nel monitoraggio dei trapianti e in alcuni tipi di infezioni.

Perché viene eseguita la citometria a flusso?

La citometria a flusso è una tecnica versatile che fornisce informazioni dettagliate sulle cellule presenti in un campione. Può essere utilizzata per i seguenti scopi:

• Conteggio e classificazione cellulare – La citometria a flusso può misurare il numero e i tipi di cellule in un campione. Può anche valutare le dimensioni cellulari e la complessità interna. Tuttavia, alcune cellule immature specifiche, come i blasti, potrebbero richiedere un'interpretazione aggiuntiva e non sempre vengono contate con precisione utilizzando solo questo metodo.

• Rilevamento di biomarcatori : il test identifica proteine ​​specifiche sulla superficie o all'interno delle cellule. Queste proteine, note come marcatori, aiutano a determinare il tipo e la funzione delle cellule e sono essenziali per la diagnosi di numerose malattie.

• Diagnosi e monitoraggio delle malattie – La citometria a flusso è comunemente utilizzata per diagnosticare la leucemia e il linfoma, nonché per monitorare le recidive o la risposta al trattamento. Può essere impiegata anche nella valutazione delle immunodeficienze e di alcune infezioni, come l'HIV.

• Immunofenotipizzazione – Si riferisce all'uso della citometria a flusso per determinare l'identità di una cellula in base alle proteine ​​che esprime. Questo è fondamentale per identificare i diversi tipi di globuli bianchi, soprattutto nella diagnosi e classificazione dei tumori del sangue.

Come viene eseguita la citometria a flusso?

La citometria a flusso in genere prevede i seguenti passaggi:

1. Preparazione del campione – Un campione di cellule, solitamente di sangue, midollo osseo o tessuto, viene prelevato e processato fino a ottenere una sospensione liquida. Le cellule vengono quindi trattate con anticorpi fluorescenti, molecole speciali che si legano a specifiche proteine presenti sulla superficie o all'interno delle cellule. Questi anticorpi emettono luce quando esposti a un laser, rendendo possibile la loro rilevazione.
2. Esecuzione del campione –  Il campione colorato viene inserito in un citometro a flusso. Il citometro utilizza un sistema fluido per far passare le cellule una alla volta attraverso un raggio laser. Ogni cellula che passa attraverso il citometro interagisce con il laser.
3. Rilevamento e analisi –  L'interazione tra il laser e le cellule provoca la dispersione della luce e i marcatori fluorescenti emettono luce colorata. Appositi rilevatori misurano questa luce e inviano le informazioni a un computer. I dati vengono quindi visualizzati in grafici e diagrammi (come diagrammi di dispersione e istogrammi) che mostrano il tipo e il numero di cellule presenti.

La citometria a flusso può analizzare da migliaia a milioni di cellule in pochi minuti.

Come vengono descritti i risultati in un referto patologico?

Un report di citometria a flusso comprende diverse sezioni che aiutano a spiegare i risultati:

• Informazioni sul campione : includono il tipo di campione analizzato (ad esempio, sangue, midollo osseo, linfonodo), la data di prelievo e qualsiasi dettaglio clinico rilevante.

• Metodologia – Breve descrizione di come è stato eseguito il test, inclusi i metodi di lavorazione delle cellule e gli anticorpi o coloranti fluorescenti utilizzati.

• Pannello di marcatori – Un elenco delle proteine ​​specifiche (chiamate marcatori) che sono state analizzate sulla superficie o all'interno delle cellule. Questi marcatori sono etichettati con nomi come CD3, CD19 o CD45 e aiutano a identificare diversi tipi di cellule, come cellule T, cellule B o blasti.

• Risultati – Questa sezione descrive le popolazioni cellulari rilevate e le quantità di ciascuna presente. I risultati possono essere riportati in percentuale o in numero assoluto e includeranno dettagli sui marcatori espressi. Ad esempio, il referto potrebbe indicare che un gruppo di cellule è CD19-positivo, il che suggerirebbe che si tratti di cellule B.

• Interpretazione – Il patologo spiega i risultati. Ciò può includere una diagnosi (come un tipo specifico di leucemia o linfoma), un commento sull'eventuale presenza di recidiva della malattia o una raccomandazione per ulteriori esami.

• Grafici – Alcuni report includono diagrammi a dispersione o istogrammi per mostrare la distribuzione delle cellule nel campione. Queste immagini aiutano a visualizzare come le cellule sono state raggruppate e identificate.

Perché la citometria a flusso è importante?

La citometria a flusso fornisce informazioni che potrebbero non essere visibili con le colorazioni di routine, come l'ematossilina-eosina (H&E) . Consente agli anatomopatologi di identificare i tipi cellulari, classificare i tumori con maggiore precisione e rilevare la malattia residua minima che potrebbe non essere visibile con altri metodi. È uno strumento fondamentale nella moderna diagnosi del cancro, soprattutto per i tumori ematologici (del sangue).

Domande da porre al medico

• Perché nel mio caso è stata eseguita la citometria a flusso?

• Quali tipi di cellule sono state trovate nel campione?

• I risultati suggeriscono una diagnosi specifica?

• Saranno necessari ulteriori test in base ai risultati?

• In che modo questi risultati influenzeranno il mio piano di trattamento?